医学微生物实验.ppt

　　医学微生物实验

　　Experiment of Medical Microbiology

　　巩固基础理论、基本概念 学习基本操作 树立无菌概念

　　微生物实验目的

　　实验室规则： 1.必须穿白大衣; 2.尽量保持安静; 3.自己的实验器材(试管、平皿等)注明菌种、日期、组、姓名; 4.除示教片以外，沾染过传染物的实验器材必须放入消毒缸; 5.注意安全;不要随意调动实验室仪器。 6.实验结束后，泡手、洗手。

　　细菌的培养法

　　细菌生长繁殖必要条件 营养物质：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子 环境条件：酸碱度、渗透压、温度和必要的气体 培养基的定义 微生物生长繁殖所需要的营养物质混合而成的营养基 质，一般pH为7.2~7.6，高压灭菌后使用。

　　培养基分类

　　按其营养组成和用途不同 基础培养基： 营养培养基： 选择培养基： 鉴别培养基： 厌氧培养基：

　　按物理状态不同 液体培养基: 用于大量繁殖细菌 固体培养基: 液体培养基中加入1.5%~2.5%琼脂粉，用于细菌分离和纯化 半固体培养基: 琼脂粉含量在0.3%~0.5%， 用于观察细菌的动力和短期保存菌种

　　细菌在培养基中的生长情况

　　液体培养基：表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长

　　固体培养基：菌落，菌苔

　　分离培养：将标本或培养物划线接种在固体培养基表面，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面分散开，称分离培养。 菌落：单个细菌生长后形成的肉眼可见的细菌集团叫菌落。 纯培养：挑取一个菌落接种到另一培养基中，生长出来的细菌为纯种，称为纯培养。

　　半固体培养基：

　　无动力 有动力

　　细菌培养的应用 在医学中的应用 感染性疾病的病原学诊断 细菌学的研究 生物制品的制备 在工农业生产中的应用 在基因工程中的应用

　　实验三 细菌的培养

　　培养基 菌种 方法

　　普通琼脂平板 大肠、金葡混和菌液 平板划线

　　肉汤培养基 大肠、枯草杆菌 液体接种

　　半固体培养基 变形、痢疾杆菌 穿刺接种

　　目的：学习掌握细菌分离和培养的各种基本技术

　　斜面培养基 大肠杆菌 斜面划线

　　2人/组

　　four-area streak plate technique

　　(Gp:) IV

　　(Gp:) II

　　(Gp:) I

　　(Gp:) 1/5

　　(Gp:) I

　　(Gp:) 1/10

　　Rotate 90?

　　Flame loop

　　Rotate 90?

　　(Gp:) Rotate 90?

　　(Gp:) III

　　(Gp:) 1/4

　　Flame loop

　　液体接种

　　斜面接种

　　细菌的形态和结构

　　细菌的形态和结构 细菌基本形态：

　　球菌

　　杆菌

　　螺 形 菌

　　细菌基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质

　　细菌特殊结构：

　　Spore

　　Capsule

　　Flagella

　　Pilus???

　　细菌的形态和结构 ：观察示教片：9张

　　真菌形态的观察

　　真菌的菌落形态

　　1.新生隐球菌：酵母型菌落;类似细菌菌落; 2.白假丝酵母菌：类酵母菌落(酵母样菌落); 3.霉菌：丝状菌落;多细胞真菌的菌落形式。

　　真菌镜下形态观察

　　1.霉菌小培养：菌丝，孢子 2.新生隐球菌墨汁涂片：厚荚膜、芽生孢子 3.白假丝酵母菌：厚膜孢子、假菌丝

　　革兰染色法

　　菌种：两个单菌落E、S 试剂：生理盐水、结晶紫、碘液、95%乙醇、沙黄 材料：酒精灯、接种环、玻片、 步骤 ①涂片 ②自然干燥 ③固定 ④染色 初染：结晶紫，1~2滴，时间1分钟，用水冲洗。 媒染：碘液， 1~2滴，时间1分钟，用水冲洗。 脱色：95%乙醇数滴，时间半分钟(30秒)，用水冲洗。 复染：沙黄， 1~2滴，1分钟，用水冲洗。 ⑤滤纸吸干，油镜观察。

　　抗酸染色法

　　标本：结核病人痰涂片，枯草涂片 试剂：石炭酸复红、3%盐酸酒精、碱性美兰 步骤 ①固定 ②染色 初染：石炭酸复红数滴，时间8~10分钟，用水冲洗。 脱色：3%盐酸酒精数滴，时间0.5~1分钟(30秒)，用水冲洗。 复染：碱性美兰， 1~2滴，1分钟，用水冲洗。 ③滤纸吸干，油镜观察。