灭菌和无菌制剂.ppt

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　　其他占位符： 经查，该公司2006年6月至7月生产的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液未按批准的工艺参数灭菌，降低灭菌温度，缩短灭菌时间，增加灭菌柜装载量，影响了灭菌效果。经中国药品生物制品检定所对相关样品进行检验，结果表明，无菌检查和热原检查不符合规定。

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　　标题： 基本概念

　　其他占位符： 灭菌和无菌制剂：直接注入体内或直接接触创伤面、粘膜等的一类制剂。 灭菌：应用物理或化学等方法将物体上或介质中所有微生物繁殖体及其芽孢全部杀灭或除去的手段。 灭菌法：杀灭或除去所有微生物繁殖体和芽孢的方法或技术。

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　　其他占位符： 无菌：在任一指定的物体、介质或环境中无任何活的微生物。 无菌操作法：在整个操作中利用或控制一定的条件，使产品避免被微生物污染的一项操作方法和技术。

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　　其他占位符： 消毒：以物理或化学等方法杀灭物体上或介质中的病原微生物。 消毒剂：对病原微生物具有杀灭或除去作用的物质。

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　　其他占位符： 防腐：用物理或化学等方法抑制微生物的生长与繁殖，亦称抑菌。 防腐剂：对微生物的生长与繁殖具有抑制作用的物质，亦称抑菌剂。

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　　药物制剂

　　规定无菌制剂： 不得检出活菌。

　　非规定无菌制剂(限菌制剂)： 限定染菌的种类与数量。

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　　无菌制剂

　　注射用制剂

　　眼用制剂

　　植入型制剂

　　创伤用制剂

　　手术用制剂

　　注射剂、输液、注射粉针

　　滴眼剂、眼用膜剂、软膏剂、凝胶剂

　　植入片

　　溃疡、烧伤及外伤用溶剂

　　止血海棉、骨蜡

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　　其他占位符： 提高药物制剂的安全性 保护制剂的稳定性 保证制剂的临床疗效

　　目的

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　　标题： 一、灭菌方法

　　其他占位符： 药剂学中灭菌法可分为三大类：即物理灭菌、化学灭菌、无菌操作法。

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　　其他占位符： 　　　　　　　　　　　　干热灭菌法 　　　　　物理灭菌法　　湿热灭菌法 　　　　　　　　　　　　射线灭菌法 　　　　　　　　　　　　过滤灭菌法　　 灭菌法　　　　　　　　　气体灭菌法 　　　　　化学灭菌法　　 　　　　　　　　　　　　化学药剂杀菌法 　　　　　无菌操作法

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　　标题： (一)物理学灭菌法

　　其他占位符： 利用蛋白质与核酸具有遇热、射线不稳定的特性，采用加热、射线和过滤方法，杀灭或除去微生物的技术称为物理灭菌法，亦称物理灭菌技术。

　　1. 干热灭菌法 2. 湿热灭菌法 3. 过滤灭菌法 4. 射线灭菌法

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　　标题： 1. 干热灭菌法

　　其他占位符： 系指在干燥环境中进行灭菌的技术。 包括： 灭菌温度和时间： 135 ~ 145℃灭菌 3 ~ 5h; 160 ~ 170℃灭菌 2 ~ 4h; 180 ~ 200℃灭菌 0.5 ~ 1h

　　火焰灭菌法

　　干热空气灭菌法

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　　标题： 火焰灭菌法

　　其他占位符： 系指用火焰直接灼烧灭菌的方法。 该法适用于耐火焰材质(如金属、玻璃及瓷器等)的物品与用具的灭菌，不适合药品的灭菌。

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　　标题： 干热空气灭菌法

　　其他占位符： 系指用高温干热空气灭菌的方法。 该法适用于耐高温的玻璃和金属制品以及不允许湿气穿透的油脂类(如油性软膏基质、注射用油等)和耐高温的粉末化学药品的灭菌，不适于橡胶、塑料及大部分药品的灭菌。

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　　标题： 2. 湿热灭菌法

　　其他占位符： 系指用饱和蒸气 、沸水或流通蒸气进行进行灭菌的方法。 包括：

　　热压灭菌法

　　流通蒸气灭菌法

　　煮沸灭菌法

　　低温间歇灭菌法

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　　标题： (1)热压灭菌法

　　其他占位符： 系指用高压饱和水蒸气加热杀灭微生物的方法。能杀灭所有细菌繁殖体和芽孢，适用于耐高温和耐高压蒸汽的所有药物制剂 、玻璃容器、金属容器、瓷器、橡胶塞、滤膜过滤器等。

　　湿热灭菌法

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　　其他占位符： 灭菌温度(蒸气表压)和时间： 116℃(67kPa)、40min; 121℃(97kPa)、30min; 126℃(134kPa)、15min 本法一般公认为最可靠的湿热灭菌法。

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　　热压灭菌器： 1)设备特点：热压灭菌器主要由灭菌腔室、锅炉蒸汽加热夹套、真空系统、进入灭菌腔室净化空气的加热系统(需干燥处理的灭菌物品)、纯蒸汽系统、压力控制系统和温度控制系统、计算机控制系统等组成。 2)常用种类：手提式热压灭菌器、卧式热压灭菌柜、水浴式灭菌器

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　　灭菌操作： 夹套通入普通蒸汽预热加压→放置待灭菌物品→抽尽空气→通入纯饱和蒸汽→灭菌一定时间→停止通气排气减压→冷却→检漏

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　　热压灭菌器使用时应注意的问题： (1)应先进行灭菌条件试验，确保灭菌效果。 考虑灭菌器的构造、被灭菌物体积、数量、排布对灭菌效果的影响，确定灭菌条件。 (2)必须将灭菌器内的空气排出。 附有真空装置，在通入蒸气前将室内空气抽出：

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　　(3)灭菌时间必须由全部药液温度达到所要求的温度时算起，压力应与规定压力一致。

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　　其他占位符： (4)灭菌完毕后，停止加热，减压至零后，放出柜内蒸气，使柜内压力与大气压相等后，稍稍打开灭菌锅待10-15分钟，再全部打开。这样可避免内外压力差太大而使物品冲出锅外和使玻璃瓶炸裂(必须注意，以免发生工伤事故)。为了缩短灭菌周期，也有对灭菌器内盛有溶液的容器喷雾水冷却，以加速冷却。

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　　标题： 水浴式灭菌锅

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　　标题： 水浴式灭菌柜

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　　标题： (2)流通蒸气灭菌法

　　其他占位符： 系指在常压下，采用100℃流通蒸气加热杀灭微生物的方法。灭菌时间通常为30-60min。该法适用于消毒及不耐高热制剂的灭菌。但不能保证杀灭所有的芽孢，不是可靠的灭菌法。

　　湿热灭菌法

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　　其他占位符： 制备过程中要尽可能避免污染，这点必须充分注意。 目前我国药厂生产注射剂，特别是1-2ml注射剂及不耐高热的品种，可考虑采用这种灭菌法。

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　　其他占位符： 系指将待灭菌物品置沸水中加热灭菌的方法。煮沸时间通常为30-60min。该法灭菌效果较差，常用于注射剂、注射针等器皿的消毒。必要时加入适量的抑菌剂，如三氯叔丁醇、甲酚、氯甲酚等，以提高灭菌效果。

　　标题： (3)煮沸灭菌法

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　　标题： 低温间歇灭菌法

　　其他占位符： 系指将待灭菌物置60-80℃的水或流通蒸气中加热60min，杀灭微生物繁殖体后，在室温条件下放置24h，让待灭菌物中的芽孢发育成繁殖体，再次加热灭菌、放置，反复多次，直至杀灭所有芽孢。 该法适用于不耐高温、热敏感物料和制剂的灭菌。 缺点是费时、工效低、灭菌效果差，加入适量抑菌剂可提高灭菌效率。

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　　影响湿热灭菌的因素 1)微生物的种类和数量： 芽孢>繁殖体>衰老体 每个容器的细菌数，控制在10个以内为宜;最初菌数愈少，达到灭菌时间愈短。 整个生产过程应尽可能避免微生物污染，尽可能缩短生产过程，并力求在灌封后立即灭菌。

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　　其他占位符： (2)注射液的性质： 注射液若含有营养物质，如糖类,蛋白质等，对微生物可能有一种保护作用，能增强其抗热性，应适当提高灭菌温度或延长灭菌时间。

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　　其他占位符： (3)蒸气性质： 饱和水蒸气 湿饱和水蒸气 过热水蒸气 不饱和水蒸气

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　　(4)介质pH： 药液pH对细菌的活性也有影响：一般微生物在中性液中耐热性最大，在碱性溶液中次之，酸性不利于微生物的发育。 所以，一般在生物碱盐类的注射液，因pH较低，用流通蒸气灭菌即可。

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　　5)药物的稳定性： 灭菌温度增高，化学反应速度增加;灭菌时间愈长，起反应的药物愈多。因此，灭菌需要考虑杀死细菌和保证药物有效性两个方面。在能达到灭菌的前提下，尽可能降低灭菌温度和缩短灭菌时间。 实践证明在力求避免微生物污染和严格质量控制的条件下，维生素C(不稳定药物)注射液用流通蒸气灭菌15分钟是可行的。

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　　6)抑菌剂的添加： 添加适当抑菌剂时，药液经100℃，30分钟加热， 可杀死抵抗力强的芽孢。 注射量超过5ml的注射液，添加抑箘剂必须审慎选择。 供静脉(除另有规定外)或椎管注射用的注射液，均不得添加抑菌剂。

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　　定义：指采用过滤法除去微生物的方法。即药物溶液通过无菌的除菌过滤器，除去活的或死的微生物而得到不含微生物的滤液。属于机械除菌方法。 适用范围：适于对热不稳定的药物溶液、气体、水等物品的灭菌。

　　3、过滤灭菌法

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　　过滤除菌滤器的要求： (1)能有效除净微生物，溶液通过滤器顺畅，滤器容易清洗，操作简便。 (2)孔径大小必须足以阻止细菌和芽孢进入滤孔之内， 以LRV(在规定条件下，指定菌液通过滤器后截留在滤膜上的孢子数的对数值)表示过滤能力。孔径通常为0.22μm(每平方厘米有效过滤面积的LRV不小于7)或更小。

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　　其他占位符： (3)采用微孔滤膜滤器除菌，常选用孔径0.22μm的滤膜。 (4)G6号垂熔玻璃漏斗，其滤孔直径在1.5μm以下，可以除去细菌，对药物不吸附， 也不影响药液的pH，是常用灭菌滤器。

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　　标题： 4、辐射灭菌法

　　其他占位符： 系指采用放射线同位素(60Co和137Cs)放射的 γ 射线杀灭微生物和芽孢的方法。

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　　其他占位符： 本品适用于热敏物料和制剂的灭菌，常用于维生素、抗生素、激素、生物制品、中药材和中药制剂、医疗器械、药用包装材料及药用高分子材料等物质的灭菌。

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　　其他占位符： 优点： 不升高产品温度，穿透力强，灭菌效率高。 缺点： 设备费用较高，对操作人员存在潜在的危险性，对某些药物(特别是溶液型)可能产生药效降低或产生毒性物质和发热物质等。

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　　标题： 5、紫外线灭菌法

　　其他占位符： 系指用用紫外线(能量)照射杀灭微生物和芽孢的方法。用于紫外灭菌的波长一般为200-300nm，最强灭菌力的波长为254nm。 该法适用于照射物表面灭菌、无菌室空气及蒸馏水的灭菌。不适合于药液的灭菌及固体物料深部的灭菌。

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　　其他占位符： 灭菌机理：紫外线可导致核酸蛋白变性，又能使空气中氧气产生微量臭氧。 紫外线穿透能力弱，并能被普通玻璃吸收，装于容器中的药物不能用紫外线灭菌。 紫外线对人体有一定的伤害，照射过久易引起结膜炎、红斑及皮肤烧灼。

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　　标题： 6、微波灭菌法

　　其他占位符： 采用微波(频率为300MHz-300kMHz)照射产生的热能杀灭微生物和芽孢的方法。 该法适用于液体和固体物料的灭菌，且对固体物料具有干燥作用。

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　　其他占位符： 微波杀菌机理

　　热效应—使微生物中蛋白质变性而失活。

　　非热效应—干扰了微生物正常的新陈代谢，破坏微生物的生长环境。

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　　其他占位符： 特点：微波能穿透到介质和物料的深部，可使介质和物料表里一致地加热;且具有低温、常压、高效、快速、低能耗、无污染、易操作、易维护、产品保质期长等特点。

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　　标题： (二)化学灭菌法

　　其他占位符： 系指用化学药品直接作用于微生物而将其杀灭的方法。 杀菌剂是指对微生物具有触杀作用的化学药品。分为气体杀菌剂和液体杀菌剂。 杀菌剂只对微生物繁殖体有效，不能杀灭芽孢。

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　　其他占位符： 气体灭菌法 该法适用于环境消毒和不耐热的医用器具、设备和设施等的消毒，亦用于粉末注射剂的消毒。常用的气态杀菌剂：环氧乙烷、甲醛、丙二醇、甘油和过氧乙酸。

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　　其他占位符： ?国家科学技术奖励大会上，威高集团的输注与介入类医用耗材制备新技术及其大规模应用项目获得国家技术发明二等奖。 改性α-烯烃共聚物和苯乙烯类共聚物及其合金材料可制作可辐照灭菌的、不含塑化剂的系列一次性医用耗材。该类耗材可辐照灭菌消毒，消除了环氧乙烷灭菌的诸多问题;无抗辐照剂析出，抗辐照老化耐久性优良，各项性能优于国外同类可辐照灭菌的产品;

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　　其他占位符： 药液灭菌法 该法常作为其他灭菌法的辅助措施，适用于皮肤、无菌器具和设备的消毒。 常用的消毒液有：75%乙醇、1%聚维酮碘溶液、0.1-0.2%新洁尔灭溶液、酚或煤酚皂溶液等。

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　　标题： 常用的化学消毒剂

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　　标题： (三)无菌操作法

　　其他占位符： 系指整个过程控制在无菌条件下进行的一种操作方法。 该法适用于一些不耐热药物的注射液、眼用制剂、皮试液、海绵剂和创伤制剂的制备. 无菌操作法包括无菌操作室的灭菌和无菌操作两个环节。

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　　标题： 无菌操作前工作

　　其他占位符： 1)定期应用环氧乙烷、甲醛、丙二醇或乳酸等对空气进行较彻底的灭菌。 每天工作前开启紫外线一小时，中午休息时间也要开0.5-1小时。 2) 用3%酚溶液、2%煤酚皂溶液、0.2%新洁尔灭溶液或75%酒精等用对室内的空间、用具(桌椅等)、地面、墙壁等喷洒或擦试。 3)其它用具：尽量用热压灭菌法或干热灭菌法灭菌。

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　　标题： 无菌操作室的灭菌

　　其他占位符： 常采用紫外线、液体和气体灭菌法对无菌操作室环境进行灭菌。 常用甲醛溶液加热熏蒸法。

　　气体发生装置 (蒸气加热夹层锅)

　　液态甲醛

　　甲醛蒸气

　　鼓风机

　　无菌室关闭熏蒸12~24h

　　湿度﹥60%温度﹥25℃

　　25%氨水

　　除气

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　　标题： 无菌操作

　　其他占位符： 操作人员进入操作之前要洗澡并换上已经灭菌的工作服和清洁的鞋子，不使头发、内衣等露出来，以免造成污染机会。 安瓿要150-180℃，2-3小时干热灭菌;橡皮塞要以121℃，1小时热压灭菌;有关器具、机器都要经过灭菌。 用无菌操作法制备的注射剂,大多要加入抑菌剂。 小量无菌制剂的制备，也可在无菌操作柜中进行

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　　无菌操作场所

　　? ?①无菌操作室; ?②层流洁净工作台; ?③无菌操作柜。

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　　标题： 二、空气净化技术

　　其他占位符： 空气净化系指创造洁净空气为目的的空气调节措施。 空气净化技术系指为达到净化要求所采用的净化方法。分为工业净化(尘埃粒子)和生物净化(尘埃粒子和微生物)。

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　　标题： 空气净化标准

　　其他占位符： 1.含尘浓度 是指单位体积空气中所含粉尘的个数(计数浓度)或毫克量(重量浓度)。 2.净化方法

　　(1)一般净化

　　(2)中等净化

　　(3)超净净化

　　主要指标

　　采用的技术

　　温度、湿度

　　温度、湿度，对含尘量和尘埃粒子有一般要求

　　温度、湿度，对含尘量和尘埃粒子有严格要求

　　初效过虑

　　初、中效二级过滤

　　初、中、高效三级过滤

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　　标题： 空气滤过器

　　其他占位符： ①空气滤过器 空气滤过器往往以单元形式制成，即把滤材装进金属或木材框架内组成一个单元滤过器。 ②气流形式与洁净度 高效滤过器的洁净空气气流有层流式和乱流式。

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　　正文： 层流 垂直层流，水平层流 入室空气符合无菌要求 空气层流。粒子运动，不易聚结，不易沉降 新产生污染物，被流动空气带走，自行除尘 避免粉末交叉污染

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　　其他占位符： 局部净化措施 洁净室造价很高，而且无法彻底消除操作人员人为造成的污染，局部净化措施可解决这一问题。如A级洁净度的局部区域(洁净操作台)安装在B级的洁净室内。

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　　净化室的设计

　　注射剂生产车间区域划分：一般生产区、控制区、洁净区和无菌区。 1、洁净区基本布局：人流(红色箭头)、物流(绿色箭头)和空气流

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　　其他占位符： 操作人员进入洁净室的流程： 外更衣室→脱衣室→淋浴室(水洗) →风淋室→更衣室→风淋室→无菌走廊

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　　其他占位符： 洁净室布置的基本原则： 1、洁净室内设备布置尽量紧凑，以减少洁净室的面积 2、洁净室内不安排窗户或窗户与洁净室之间隔以封闭式外走廊

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　　其他占位符： 3、洁净室的门要求紧闭，人、物进出口处装有气闸 4、同级别的洁净室尽可能安排在一起

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　　其他占位符： 5、不同级别的洁净室由低级向高级安排，彼此相连的房间之间应设隔门，按洁净登记设计相应压差，门的开启方向朝向洁净度级别高的房间。

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　　其他占位符： 6、洁净室保持正压，空气洁净级别不同的相邻房间的静压差应大于5Pa,洁净室与室外大气的静压差应大于10Pa; 7、照光度按GMP规定 8、无菌区的紫外光灯，一般安装在无菌工作区的上侧或入口处

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　　标题： 无菌药品生产洁净区级别

　　其他占位符： 我国GMP将无菌药品生产所需洁净区分为A、B、C、D四个级别： A级：高风险操作区。如灌装区，放置胶塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的区域，无菌装配等区域 通常用层流操作台(罩)来维持该区的洁净状态

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　　其他占位符： B级：指无菌配制和灌装等高风险操作A级区所处的背景区域 C级和D级：指生产无菌药品过程中重要程度较次的洁净操作区。

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　　其他占位符： D值 D值为在一定温度下，杀灭90%微生物所需的灭菌时间。 D值因待灭微生物的种类、药液的配方及性质、用作生物指示剂的微生物种类;微生物所接触的表面的性质、灭菌工序(如温度)等不同而各异。

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　　其他占位符： Z值： Z值：为D值降低一个对数值所需升高的温度数，即灭菌时间减少到原来的1/10时所需升高的温度或在相同灭菌时间内，杀灭99%的微生物所需要提高的温度。 在不同温度下对特定的微生物在特定介质或环境中求得D值后，再计算Z值。Z值通常在湿热灭菌时取10℃，在干热灭菌时取20℃。

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　　其他占位符： F值与F0值 F为在一定温度(T)，给定Z值所产生的干热灭菌效果与参比温度(T0)给定Z值所产生的灭菌效果相同时，T0温度下所相当的时间，以分为单位。即整个灭菌过程的效果相当于T0温度下F时间的灭菌效果。 F0值为在一定灭菌温度(T)、Z值为10℃所产生的湿热灭菌效果与121℃，Z值为10℃所产生的灭菌效果相同时所相当的时间(min)。

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　　F0值的计算对于验证灭菌效果极为有用，当产品以121℃湿热灭菌时，灭菌器内的温度虽能迅速升到 121℃，而被灭菌物品内部则不然，由于包装材料性能及其他因素影响而使升温度各异，而F0将随着产品温度(T)变化而呈指数的变化，故温度即使很小的差别(如0.1-1)将对F0 值产生显著的影响。同时要求测定灭菌物品内的实际温度，故用F0 来监测灭菌效果有重要的意义。由于F0 是将不同灭菌温度折算到相当于 121℃湿热灭菌时的效力，故F0值可作为灭菌过程的比较参数。

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　　影响F0值的因素： ①容器大小、形状及热的穿透性等。 ②灭菌产品溶液的性质、填充量等。 ③容器在灭菌器中的数量及分布等。 测定F0值应注意： ①先应选择灵敏度高，重现性好，精密度为0.1的热电偶，并对热电偶进行校验。 ②灭菌时应将热电偶的探针置于被测物的内部，经灭菌器通向柜外的湿度记录仪，有些灭菌记录仪附有F0计算器，在灭菌过程中和灭菌后，自动显示F0值。

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　　3.洁净室的净化度标准 ?(1)药品生产管理规范中净化度标准

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　　(2)美国联邦洁净室标准(209B)中净化度标准

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　　标题： 空气净化技术

　　其他占位符： 空气滤过是空气净化的关键措施之一。 1.过滤方式 空气滤过属于介质滤过，可分为表面滤过和深层滤过。 (1)表面过滤：系指大于过滤介质微孔的粒子被截留在介质表面，使其与空气得到分离的方法。常用的过滤介质有醋酸纤维素、硝酸纤维素等微孔滤膜。 (2)深层过滤：系指小于过滤介质微孔的粒子被吸附在介质内部，使其与空气得到分离。常用的过滤介质有玻璃纤维、天然纤维、合成纤维、粒状活性炭、发泡性滤材等。

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　　标题： 空气滤过的机理：

　　其他占位符： 当含有粉尘的空气通过具有很多细孔的滤过介质时，粉尘被孔壁吸附或截留而与空气分离。其滤过机理复杂，主要有以下几种： (1)拦截作用： 当粒径大于纤维间的间隙时尘粒被纤维截留的作用。 (2)吸附作用：小于过滤介质微孔的粒子与纤维发生接触被吸附，

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　　标题： 空气滤过的影响因素有：

　　其他占位符： ①???? 粒径大小 粒径越大，惯性、拦截作用越大，粒径越小，扩散作用越显著。 中间粒径的滤过效率较低，因此常以中间粒径的粒子来检查高效滤过器的效率。 ②???? 滤过风速 风速越大，惯性作用强，但风速过大，易将纤维表面附着的尘粒 吹出，且风速过大滤过的阻力增加;风速小扩散作用强，能捕集小尘粒，滤过的阻力也小。

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　　标题： 空气滤过的影响因素有

　　其他占位符： ③介质纤维直径和密实性 纤维越细，越密实，则接触面积越大，惯性作用与拦截作用越强，但滤过的阻力增加。 ④附尘 随着滤过的进行，在纤维表面沉积的尘粒可增加拦截效果，但尘粒有再次飞散的可能，因此需要定期清洗滤过介质。

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　　其他占位符： 初效过滤器：滤除>5μm的尘粒，效率达20%～80%，也称预过滤器，采用易拆卸的平板型或袋型。 中效过滤器：滤除>1μm的尘粒，效率达20%～70%，外形结构与初效过滤器相似，滤材不同。 亚高效过滤器：滤出<1μm的尘粒，效率达95%～99.9%，采用叠式过滤器。 高效过滤器：滤出<1μm的尘粒， 对0.3μm的尘粒过滤效率达99.97%以上，采用折叠式过滤器，特点是效率高、不能再生、安装时不能倒装。

　　空气过滤器的分类