标本中未知肠道感染细菌的分离鉴定程序.ppt

　　标本中未知肠道感染细菌的分离鉴定程序

　　标本

　　脓血便、肛拭子

　　选择/鉴别培基

　　生化反应

　　血清学鉴定

　　克氏双糖铁培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基

　　(Gp:) 玻片凝集试验

　　SS平板,中国兰,EMB平板

　　标本中未知病原性球菌的分离鉴定程序

　　直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性 观察菌落性状、溶血性、色素 血琼脂平板 涂片、染色、镜检 挑取可疑菌落 生化反应测定 纯培养 致病性测定 (凝固酶、耐热核酸酶)

　　标本

　　血液 脑脊液

　　肉汤增菌培养

　　涂片染色镜检

　　设计性实验

　　临床标本中病原菌的分离与鉴定

　　设计性实验

　　1.脓汁 标本：脓拭子 培养基：血琼脂平板 其他：3%H2O2、兔血浆、生理盐水、革兰染液、玻片等 2.痰 标本：咽拭子 培养基：血琼脂平板 其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等

　　3.尿 标本：尿液 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等 4.粪便 标本：肛门拭子 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等

　　脓拭子

　　分离培养 (血平板)

　　革兰染色

　　革兰染色

　　触酶实验

　　血浆凝固酶实验

　　咽拭子

　　革兰染色

　　革兰染色

　　胆汁溶菌试验 奥普托辛试验

　　荚膜染色 (石炭酸复红单染)

　　分离培养 (血平板)

　　尿液

　　离心沉淀 1500转，10分钟

　　分离培养 (EMB平板)

　　革兰染色

　　革兰染色

　　克氏双糖铁斜面培养基

　　动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基

　　观察结果

　　观察结果

　　观察结果

　　完成靛基质试验

　　肛门拭子1/2

　　EMB平板

　　克氏双糖铁斜面培养基

　　动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基

　　观察结果

　　观察结果

　　完成靛基质试验

　　玻片凝集试验

　　1. EMB平板(伊红美蓝琼脂培养基) 组成：无糖培养基+乳糖+伊红+美蓝 底物 指示剂、抑菌剂 原理： 细菌 乳糖 产酸：伊红+美蓝 紫黑/紫红 结果： 分解乳糖细菌 菌落变黑，有金属光泽 不分解乳糖细菌 菌落无色、半透明(粉色)

　　分解

　　培养基原理

　　EMB agar

　　2. 靛基质试验(吲哚试验) 组成：蛋白胨水+色氨酸 原理： 分解 某些细菌有色氨酸酶 色氨酸 吲哚(无色)+柯氏 试剂 玫瑰吲哚(红色) 结果：液面形成玫瑰红色

　　吲哚试验

　　3. 克氏双糖铁斜面培养基反应试验 组成：无糖培基+1份葡萄糖+10份乳糖+铁盐+酚红 营养 底物 底物 底物 指示剂 原理： 只分解葡萄糖 产酸(葡萄糖少，产酸量少) 分解葡萄糖+乳糖 产酸(乳糖多，产酸多) 上下层均为黄色 产生H2S+铁盐 FeS 培养基成黑色

　　上层氧化 呈红色 下层缺氧 不氧化 呈黄色

　　Double suger iron slant

　　4. 尿素培养基 组成：基础培基+尿素+酚红 底物 指示剂 原理： 有些细菌产生尿素酶 分解尿素 产氨 结果： 分解尿素 培基变红 不分解尿素 培基不变色

　　Urea slant

　　肥达试验(4人/组)

　　材料：病人未知血清：1#，2#，3# 菌液：O、H、PAH、PBH(已知Ag) 每组1块多孔板，标记 每人2支吸管

　　1 2 3 4 5 6 NS(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 未知血清 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (1:10) 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 菌液(摇匀) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (4种，1种/人) 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 (阴性对照) 37℃水浴过夜

　　方法

　　弃0.5ml于消毒缸

　　肥达试验

　　H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底 O凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底 凝集程度的判定以“+”、“-”号表示 ++++ 上清完全透明，细菌全部形成凝集块 +++ 细菌绝大多数凝集，液体有轻度混浊 ++ 50%细菌形成凝集，液体半澄清 + 仅少数细菌凝集，液体比较混浊 - 液体均匀混浊，无凝集(沉于管底，形成圆 形沉淀，边缘整齐)

　　以呈现++凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价 1 2 3 4 5 6 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 对照 O ++++ ++ ++ - - - H ++++ +++ ++ ++ - - PAH ++ + - - - - PBH + - - - - -

　　肥达试验

　　肥达反应

　　1 2 3 4 5 O 1:160 1:320 1:160 1:40 1:40 H 1:320 1:80 1:80 1:80 1:320 PAH 1:40 - 1:320 1:80 1:320 PBH - 1:80 1:80 1:40 1:320 PCH - - - 1:40 - 伤寒 伤寒早期 副甲 阴性 回忆反应/疫苗接种

　　肠道杆菌的血清学试验(玻片凝集试验)

　　材料 1. 菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物 2. 伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水 方法

　　血清

　　生理盐水