细胞内微核的检测.ppt

　　实验(四)遗传病的分析2

　　细胞内微核的检测 系谱分析

　　细胞内微核的检测

　　原 理

　　环境中有害物质可导致细胞中染色体或纺锤体的损伤，产生的染色单体或无着丝粒染色体片断在细胞分裂末期滞留于子细胞胞质中，形成微核。

　　原 理

　　本实验选用培养细胞，用环磷酰胺作诱导剂(射线、顺铂等) ，促使细胞中染色体断裂，产生微核。 微核经Giemsa染色后呈紫红色，胞质被染成淡灰蓝色。

　　器材与试剂

　　显微镜、载玻片、染色缸、滴管等 培养细胞(小盖片) 甲醇固定液 PBS(pH7.4) Giemsa应用液(临用现配) Giemsa原液：PBS=1：9混合而成。

　　操 作

　　培养细胞(小盖片)——加环磷酰胺1mg/ml——PBS洗涤3次——甲醇固定5min——Giemsa染色5min——自来水冲洗——显微镜下观察——计数

　　24h

　　微核的计算

　　先用低倍镜粗检，后用高倍镜，选择细胞分布均匀，细胞无损，着色适当的区域，计数。 每张玻片计数100-200个细胞，按“1‰”计算微核的出现率，微核计数以“细胞”为单位，即一个细胞中出现2个或2个以上微核时，只按“1”计算。

　　结 果

　　微核大多数呈单个圆形，边缘光滑整齐，嗜色性与核质相一致，呈紫红色或蓝紫色。

　　注意事项

　　正确掌握微核的形态特征，避免假阳性。 以有核细胞形态是否完好作为判断制片优劣的标准