肝组织中核酸的提取及其成分鉴定.ppt

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　　肝组织中核酸的提取及其成分鉴定

　　生物化学实验 CQMU

　　生物化学与分子生物学实验室

　　【实验目的】

　　2、了解本实验设计思路。

　　1、学习离心技术，掌握离心机的正确使用。

　　生物大分子的分离提取原则

　　生物大分子分离提取原则是以生物大分子的理化性质(分子大小、形状、溶解度、带电性质等)为依据，周密设计分离提取流程图，将目的分子与其他分子分离提纯的过程。

　　分离纯化的基本步骤

　　1、取材

　　2、组织细胞破碎

　　3、分离纯化

　　4、成品

　　5、分析鉴定

　　离心技术

　　离心机根据应用目的分为制备和分析两种用途。

　　制备用离心机是应用最广泛的离心机，根据其性能可分为低速离心机、高速离心机和超速离心机。

　　离心机和离心法

　　一种通过使样品绕离心转轴的中心旋转而在其上产生一个远大于地球重力的仪器。不同大小、不同形状、不同密度的颗粒在同一离心力场内会以不同的速度沉降而分离。颗粒的沉降速度取决于离心机的转速和颗粒与中心轴的距离。

　　离心力的计算

　　离心机的加速度通常用重力加速度(g=9.80m.s-2 )的倍数表示,被称为相对离心力(RCF或g值)。 RCF取决于转子的转数(n,以每分钟转数计,r/min)和旋转半径(r，以mm计): RCF在离心管内不相同，靠转子外最大,靠中心轴最小，有表可查。

　　离心机种类及用途

　　1、低速离心机常规使用,台式,最大速度3,000~6,000r/min, RCF可达6,000g。常用于收集细胞、细胞核或叶绿体等较大的细胞器、抗原-抗体复合物等粗颗粒沉淀。 2、高速离心机较大立式，常有制冷系统。最高速率可达25, 000r/min、RCF达60,000g。用于分离微生物细胞、线粒体、溶酶体等细胞器和蛋白质沉淀物。

　　3、超速离心机

　　一类速度非常高的离心机，最大转速超过30,000r/min，最大RCF可达600,000g，用于沉淀核糖体、膜泡等小的细胞器和生物大分子。具有精密的制冷、真空装置。

　　4、微量离心机台式,能迅速加速到12,000r/min,10,000g 用于短时间(0.5 ~1.5min)对大颗粒沉淀、小体积溶液(小于1.5ml)的沉降，尤其用于从液体培养基中快速分离细胞。

　　实验步骤

　　猪肝匀浆制备

　　分离提取核酸

　　离心

　　水解核酸

　　鉴定

　　【实验原理和操作】

　　1.制备肝匀浆猪肝 + 生理盐水肝匀浆

　　匀浆器