血清蛋白质标记物在肾母细胞瘤中的临床应用研究.ppt

　　血清蛋白质标记物在肾母细胞 瘤中的临床应用研究

　　xx儿童医院普外科 xxx

　　无法满足临床无创、简便、高效、快速的早期诊断及指导治疗和监测预后的要求

　　肾母细胞瘤诊断现状

　　B超 彩超 CT 肾动脉造影 MRI IVP 同位素骨扫描 腹部平片

　　临床要求：准确、无创、简便、早期诊断制定治疗方案指导临床分期和监测预后

　　研究应用新的技术手段与判断方法 构建肾母细胞瘤早期诊断 分期模型及预后模型

　　肿瘤细胞的 蛋白质表达谱

　　生物信息学

　　基因组表达的整套蛋白质进行分析

　　正常对照的蛋 白质表达谱

　　蛋白质组学

　　多种标志物联合

　　诊 断 模 型

　　蛋白组学的发展为肿瘤诊断提供了新的思维和技术平台

　　分 期 模 型

　　预 后 模 型

　　SELDI-TOF-MS特点

　　高通量(96孔) 可靠的重复性 灵敏度高(1-50fmol) 简便(无需纯化样品) 检测范围广(500Da-500kD) 所需样本体积小(0.5-400ul)

　　生物信息学技术

　　树型决定结构 等级分聚类 人工神经网络 支持向量机

　　支持向量机主要思想

　　1. 使用非线性映射算法—— 将输入向量映射到高维特征空间 2. 基于结构风险最小化理论—— 在特征空间中建构最优分割超平面

　　临床资料

　　血 清 样 本 75 例

　　正常对照20例

　　其他小儿腹部实体肿瘤25例

　　肾母细胞瘤100例

　　神经母细胞瘤9例

　　肝母细胞瘤5例

　　胰母细胞瘤2例

　　腹膜后畸胎瘤5例

　　(男11例，女14例,平 均年龄3.5岁)

　　(男63例，女57例,平均年龄2.8岁)

　　横纹肌肉瘤3例

　　(来自本院小儿外科门诊体检的健康小　　　　儿。性别、年龄与肾母细胞瘤配对)

　　所 有 标 本 均 经 病 理 证 实

　　肾上腺皮质癌1例

　　PBS-Ⅱ型SELDI-TOF-MS系统 分析参数： 激光强度为170， 灵敏度为6， 每个样本收集总点数140次; 收集数据范围1000-50000Dal 优化范围2000到20000Dal。

　　主要试剂 NaNc： 分子量136.0 (上海生工生物工程公司) 脲素： 分子量60.6 (Promega Inc. 美国) 乙腈： 分子量41.05 (Sigma Inc. 美国) CHAPS： 分子量604.9 ( Promega Inc. 美国) SPA： 能量吸收基质 (Ciphergen Inc. 美国) U9缓冲液：9M脲素、 2% CHAPS、1%DTT 50% 饱和SPA，充分振荡5分钟，离心1分钟，再加上等体积的上述混合溶液

　　(Gp:) 清晨、空腹 抽取5ml全血

　　(Gp:) 室温下静置1-2小时使血液凝集

　　(Gp:) 4℃3000r/min 离心10min

　　(Gp:) 置于4℃冰浴上，分装于100ul/管

　　(Gp:) -80 ℃冰箱保存

　　血清标本留取与保存

　　结 果

　　结 果

　　肾母细胞瘤各项传统检查符合率

　　摘自文献

　　结 论

　　肾母细胞瘤患儿血清蛋白质标记物 筛出m/z峰值位于6984.0和6455.0的 蛋白质标志物2个 与正常组比较 患儿组此两峰处的蛋白质低表达 (P<0.05)

　　结 论

　　24例手术前后血清蛋白质标记物的比较 术前呈低表达或不表达 21例根治术患儿术后2周标本 高表达19例低表达2例 3例姑息性切除患儿手术前后 比较差异无统计学意义

　　肾母细胞瘤I、II、III、IV期的M/Z的强度 依次降低的,分期愈高其M/Z强度愈低 术中没有彻底切除肿瘤 M/Z强度较低与术前没有明显区别 I期与正常儿童M/Z区别不明显(I期低于健康儿童) M/Z强度愈高，分期愈低，预后愈好

　　结 论

　　结 论

　　应用SELDI-TOF -MS技术和SVM方法构建的分期模型 成功区分肾母细胞瘤Ⅲ+Ⅳ期与 肾母细胞瘤Ⅰ期+Ⅱ期患儿 指导临床制定合理的治疗方案 提高治愈率 改善预后

　　早期诊断灵敏性高，特异性高 无创，简便 结果稳定，不受主观因素影响 分期准确，提高预后，延长生存期

　　构建判别模型的特点

　　存在问题

　　SELDI-TOF-MS技术不足之处： 标准化 需要大量样本的验证。