口腔上皮细胞巴氏小体的观察.ppt

　　口腔上皮细胞巴氏小体的观察

　　一、 实验目的 掌握人体性染色质的检测方法; 观察人体性染色质的形态特征及存在部位;为进一步研究人体染色体的畸变与疾病提 供参考条件; 了解雌性哺乳动物X染色体失活假说和剂量补偿效应的机制

　　二、 实验原理

　　1949年M.L.Barr等研究发现了雌猫神经细胞核膜内具有凝缩的深染小体(巴氏小体)，而雄性个体细胞中则没有.进一步研究发现：所有哺乳类雌体细胞中都可以见到这一结构。

　　巴氏小体是雌性哺乳动物体细胞 中失活的X染色体，在间期细胞核中呈异固缩状态(染色质高度螺旋化)，直径约1μm，贴近于核膜边缘的染 色小体。 细胞分裂间期 细胞核中出现异固缩现象：浓缩、 染色深、无活性; 细胞分裂期 可形成正常的染色体形态;复制 时间比有活性的X染色体稍迟一些。

　　Barr小体的数目=n-1(n为X染色体数目) 正常女人的体细胞间期核中Barr小体为1; 正常男人的体细胞间期核中Barr小体为0; XXX女人的体细胞间期核中Barr小体为2; XXXX女人的体细胞间期核中Barr小体为3。

　　定义：具有两份或两份以上的基因量的个体与只有一份基 因量的个体的基因表达趋于一致的遗传效应. 举例：雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化(失活)， 只有一条X染色体具有活性，使雌雄动物虽然X染色 体数目不同但基因产物的剂量是平衡的。

　　剂量补偿效应 (dosage compensation effect)

　　莱昂假说(Lyon hypothesis)

　　①巴氏小体是一条失活的X染色体;哺乳动物雌性个体两 条X染色体的其中一条在受精后失活; ②两条X染色体中哪一条失活是随机的;在同一哺乳动物的体细胞中，有些父源X染色体失活，有些为母源失活。 ③失活在胚胎早期发生(人类在胚胎发育16天时)，失活的X染色体在以后分裂中不会复活;当生殖细胞形成时，失活的染色体可恢复。 ④杂合体雌性在伴性基因的作用上是嵌合体。

　　X-染色质的形态表现为一结构 致密的浓染小体;轮廓清楚;大小 1～1.5μm;常附着于核膜边缘或 靠近内侧;形状为凸形、三角形、 卵形、短棒及双球形等。 正常女性口腔黏膜细胞中出现 率：30 ～50%。

　　三、 实验材料

　　1、器材： 显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、牙签等 2、试剂： 改良苯酚品红、60%醋酸(盐酸) 3、实验材料： 女生口腔黏膜细胞(男生为对照)

　　四、实验步骤

　　(1)取干净载玻片，用记号笔在将涂细胞的一面右上角做好标记; (2)嗽口(三次)，尽可能除去口中杂物; (3)用牙签刮取颊部粘膜上皮细胞，弃第一次刮取物，在同一部位继续刮取; (4)将刮得的细胞涂在干净载玻片上，反复几次，使玻片上的材料尽可能多些; (5)空气中干燥; (6)涂片区滴上100μl的60%冰醋酸(盐酸)固定5分钟; (7)吸去冰醋酸，滴20μl改良苯酚品红染色2分钟; (8)压片; (9)将玻片置于显微镜下观察。

　　五 观察 在女性间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微米大小的反光极强的颗粒状亮点，即为巴氏小体。材料不同，观察结果可能有不同，且必须和核仁区别开来(核仁往往离核膜较远或接近核中央部位)。

　　箭头所示为巴氏小体 (女性细胞[左]中存在，男性细胞[右]中没有)

　　注意事项 1.刮口腔上皮前要漱口; 2.刮时用灭菌牙签的宽边，勿用一角，以免划破口腔; 3.第一次刮下的脱落细胞用酒精棉球擦去，在原位重复刮一下制片; 4.盛放酒精棉球的小广口瓶，瓶盖用完即时盖好; 5.涂片略干再加改良苯酚品红; 6.染色时间不要太长，否则核质着色深，X染色质体不易区分; 7.可数细胞的标准：核质染色呈网状或颗粒状;核膜清晰，无缺损;染色适度，周围无杂质。