艾滋病实验室检测指标的意义和作用.ppt

　　艾滋病实验室检测指标的意义和作用

　　xx疾病预防控制中心 艾滋病确证中心实验室 xxx

　　主要内容

　　HIV抗体检测 CD4检测

　　(Gp:) HIV抗体-

　　(Gp:) 感染成功

　　(Gp:) 抗体转阳

　　(Gp:) 诊断艾滋病

　　(Gp:) 死亡

　　(Gp:) - 4-8周-

　　(Gp:) 出现症状

　　(Gp:) 2-10 年

　　(Gp:) 1年 ?

　　(Gp:) 0.5-2年 ?

　　(Gp:) HIV抗体+ 无症状

　　(Gp:) 有症状

　　(Gp:) HIV抗体+

　　(Gp:) 艾滋病

　　感染艾滋病毒后的自然发展过程

　　(Gp:) 急性感 染期

　　(Gp:) 潜伏期

　　(Gp:) 发病期

　　艾滋病感染者

　　艾滋病患者

　　窗口期

　　KINETICS OF VIRAL MARKERS DURING PRIMARY HIV-1 INFECTION

　　HIV RNA

　　HIV p24 antigen

　　HIV antibodies

　　HIV感染后血液中核酸、抗原和抗体动态变化

　　窗口期

　　暴露

　　天数

　　检测域

　　感染HIV后病毒载量、CD4与病程变化规律

　　艾滋病实验室分类

　　筛查实验室(CD4检测实验室) 确证实验室(CD4、病毒载量实验室…)

　　中国HIV实验室网络 国家艾滋病参比实验室 中国CDC性艾中心 艾滋病确认中心实验室 省、市 艾滋病确认实验室 省、市 艾滋病筛查中心实验室 省、市、州、县 艾滋病筛查实验室 省、市、州、县 艾滋病检测点 乡、镇

　　HIV实验室条件

　　人员:经过专门技术培训,取得培训合格证/上岗证; 环境:功能分区,符合生物安全二级要求; 仪器设备:按要求配备，满足检测要求。 实验室必须经过资质认证/验收!

　　HIV病原体诊断

　　HIV抗体检测 艾滋病病毒抗原检测(P24) HIV核酸检测 病毒分离

　　检测样品

　　血清、血浆 尿液 抗凝全血(CBC、CD4、VL…) PBMC(外周血淋巴细胞)

　　样品的采集和处理

　　一、样品的采集 最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血(抗凝血)。 唾液或尿液有时也可作为测试样品。常用样品的采集方法如下： (一)采集样品应按临床采血技术规范及检测试剂盒要求进行。 (二)采集标本时应注意安全，操作应戴双层手套。建议采用真空采血管及蝶形针具，以免直接接触血液。

　　(三)血清样品采集：用注射器抽静脉血3-5ml，室温放置1-2小时，待血液凝固或用3000rpm离心15分钟，吸出血清备用。 (四)抗凝血样品采集(免疫功能CD4/CD8测定、血液常规CBC测定)：用加有抗凝剂(K3EDTA)的真空采血管或试管抽取静脉血，反复轻摇，常温6小时以内送达实验室检测CD4/CD8或CBC后，再分离血浆和血细胞备用。

　　(五)血清或血浆样品应存放于-20℃， 短期内(1周)进行检测的样品可存放于2-8℃。 (六)用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃以下，进行病毒 RNA检测的样品如长期(3个月以上)保存应置于-80℃。

　　二、样品的运送 抗体检测实验室间传递的样品应为血清或血浆，血液常规、CD4和病毒载量等要求送抗凝血。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。

　　HIV抗体检测的目的

　　诊断 确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。 血液筛查 防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 监测 了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。

　　HIV抗体检测的方法

　　筛查试验(包括初筛和复检)：酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光试验、明胶颗粒凝聚试验(PA)、免疫渗滤试验、免疫层析试验等 确证试验：免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验、免疫荧光试验等。

　　艾滋病抗体确证试验

　　免疫印迹法(WB)为目前最常用的HIV抗体确认方法，被公认为判断HIV感染的黄金方法。

　　HIV抗体检测结果及结论

　　HIV抗体筛查结果阴性反应可做HIV抗体阴性报告，筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复查”报告，不能出HIV抗体阳性报告。筛查阳性反应或可疑阳性反应不能作最终报告通知被检测者，对个体诊断来说,只有经过确证试验，结果阳性才可做HIV抗体阳性报告。

　　检测程序及流程图 1、筛查检测 验收标本，用筛查试剂进行检测，如呈阴性反应，报告HIV抗体阴性;对呈阳性反应的标本，须进行重复检测。 2、重复检测 对筛查呈阳性反应的标本用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂重复检测。

　　HIV抗体筛查检测流程

　　(Gp:) 样 品

　　(Gp:) 初筛检测

　　(Gp:) 筛查试剂

　　(Gp:) 阳性反应

　　(Gp:) 阴性反应

　　(Gp:) 重复检测

　　(Gp:) 原有试剂和另外一种不同原理(或厂家)的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂

　　(Gp:) 一阴一阳

　　(Gp:) 均阴性反应

　　(Gp:) 均阳性反应

　　(Gp:) 送确认实验室确认

　　(Gp:) 报告阴性

　　HIV抗体确证 1、常用的确证实验方法是免疫印迹法(WB)。 2、免疫印迹试剂有HIV-1/2混合型和单一型。一般先用HIV-1/2混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性，如果呈阳性反应，则报告HIV-1抗体阳性，如果不满足阳性标准，则判为HIV抗体不确定。如果出现HIV-2型的特异性指示条带，还需要用HIV-2型免疫印迹试剂再做单一的HIV-2型抗体确认试验，呈阴性反应，报告HIV-2抗体阴性;呈阳性反应的则报告HIV-2抗体血清学阳性。

　　HIV抗体确证检测流程

　　(Gp:) 免疫印迹法(WB，HIV-1/2混合型)

　　(Gp:) HIV-1阳性反应

　　(Gp:) 不确定反应

　　(Gp:) 出现HIV-2指示条带

　　(Gp:) 报告HIV-1阳性

　　(Gp:) 结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性;如随访期间出现阳性反应，则报告阳性;如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性;满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。

　　(Gp:) 阴性反应

　　(Gp:) 报告阴性

　　(Gp:) 筛查试验阳性反应样品

　　(Gp:) 根据具体情况进一步检测HIV-2

　　检测结果的报告和处理 1、 HIV抗体筛查： 筛查实验呈阴性反应出具HIV抗体阴性报告，如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除“窗口期”的可能，建议2—3个月以后再做抗体检测。 筛查实验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复查”报告，不能出阳性报告。

　　HIV抗体筛查呈阳性的处理

　　(1)填写HIV抗体筛查阳性送检单 样品连同HIV抗体筛查阳性送检单一并送当地艾滋病筛查中心实验室，再转送艾滋病确认实验室，或直接送确认实验室确认。 (2)筛查中心实验室应尽快进行复测。 (3)做好检测后咨询。

　　HIV抗体确证结果报告

　　1、 HIV抗体阳性应出具HIV抗体阳性确认报告，并按相关规定做好咨询、保密和报告工作; 2、HIV抗体阴性应出具HIV抗体阴性确认报告，如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除“窗口期”的可能，建议1个月以后再做抗体检测;

　　抗体确证不确定结果

　　HIV抗体不确定出具HIV抗体不确定确认报告，在备注中应注明“1个月后复查”。 1、随访：每1个月一次，连续2次，共2个月。 2、做好检测后咨询。

　　全国艾滋病检测技术规范

　　2009版

　　全国艾滋病检测技术规范

　　2009版

　　HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测策略及流程

　　适用范围 HIV感染产妇所生婴幼儿;已满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。

　　HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测策略及流程

　　检测程序及结果报告 婴儿满12个月进行第一次HIV抗体检测。使用两种不同原理或不同厂家筛查试剂进行抗体检测，两种筛查试剂检测结果均为阴性反应，报告“HIV抗体阴性(-)”，可排除感染。检测结果出现阳性反应(一种为阴性反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应)，不能排除感染，应继续追踪随访，至儿童满18个月时再次进行HIV抗体检测。

　　HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测策略及流程

　　检测程序及结果报告 婴儿满18个月时应再次进行HIV抗体检测。使用两种不同原理或不同厂家筛查试剂进行抗体检测。两种筛查试剂的检测结果均为阴性反应，报告“HIV抗体阴性(-)”，可排除感染。检测出现阳性反应(一种为阴性反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应)，进一步进行确证试验，根据确证试验的结果判断是否感染HIV 。

　　HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测策略及流程

　　检测程序及结果报告 在发放检测报告的同时上报疫情; 做好检测后咨询。

　　全国艾滋病检测技术规范

　　2009版

　　免疫功能(CD4/CD8)的检测

　　T淋巴细胞分类

　　在T淋巴细胞分类中，CD4代表T辅助细胞而CD8代表T抑制细胞和T杀伤细胞。CD4+T淋巴细胞是HIV感染的主要靶细胞，也是免疫反应的中心细胞;CD8+T淋巴细胞是免疫反应的效应细胞。

　　T淋巴细胞分类

　　正常人的CD4+T淋巴细胞约占总的T淋巴细胞的65%，CD8+T淋巴细胞约占35%。人体感染了HIV后，涉及的主要病理过程就是免疫系统的损害，主要表现为：CD4+T淋巴细胞的丢失，绝对数量的减少，同时CD8+T淋巴细胞数量增加，CD4和CD8的比例失调。因此CD4+T淋巴细胞计数作为直接测定免疫功能的方法，是提供HIV感染病人免疫系统损害状况最明确的指标。

　　CD4+T淋巴细胞正常值

　　CD4：410-1590/mm3 CD8：190-1140/mm3 CD4/CD8：>1

　　CD4+T淋巴细胞计数意义

　　是艾滋病疾病分期、确定诊断、制定抗病毒治疗和预防机会性感染方案的标准实验室指标，也是与病毒载量相配合预测疾病进程的可靠指标。

　　CD4+T淋巴细胞检测意义

　　1、用于HIV感染者的疾病分期：凡CD4+T淋巴细胞<200/mm3或CD4+T淋巴细胞的百分比<14%的HIV感染者可归入艾滋病。

　　CD4+T淋巴细胞检测意义

　　2、判断HIV感染者的临床合并症(各种机会性感染与CD4+T淋巴细胞的相关性)，如CD4+T淋巴细胞<200/ mm3时，很容易发生卡氏肺囊虫肺炎;而巨细胞病毒感染和鸟分支杆菌感染常发生于CD4+T淋巴细胞<50/mm3的病人，极少见于CD4+T淋巴细胞>100/mm3的病人。

　　CD4+T淋巴细胞检测意义

　　3、 帮助确定抗HIV药物治疗及机会性感染预防性治疗的适应症，例如，当CD4+T淋巴细胞<200/ mm3时，应给予抗卡氏肺囊虫肺炎的预防性治疗; 　 4、抗HIV药物疗效的重要判断指标。

　　成人及青少年艾滋病分期标准(美国CDC.1993)

　　CD4<200/ul和/或出现艾滋病指征性症状(如卡氏肺囊虫肺炎等)时，就可定义为进入艾滋病期。如表中A3，B3，C1-3期。

　　CD4检测样品要求

　　抗凝血 新鲜、不溶血、无脂肪血 按要求常温送检 信息满足要求

　　样品的采集

　　1、合适抗凝管：有2ml、 4ml、 10ml不同容量管; 2、抗凝剂：用于流式细胞仪免疫表型检测的抗凝剂(K2EDTA，K3EDTA); 3、采血管上注明样品编号等信息; 4、按管的容量采集; 5、采血后立即握住试管两端，垂直轻柔颠倒混匀数次，防止血液凝固; 6、填写相应的送样单，信息满足要求，编号与采血管一致。

　　样品检测要求、报告及结果录入

　　建议实验室及时检测; 一般要求24小时内染色，染色后6小时内分析; 两天内出报告，报告及时反馈到治疗点; 治疗点及时将检测结果录入国家治疗信息系统。

　　CD4实验室网络

　　全区目前共有17个CD4检测实验室，分布12个市级CDC，3家医院和1个县级CDC，2011年自治区卫生厅新招标采购5台流式细胞仪，将陆续配备到疫情较为严重的县级CDC、鹿寨县国际合作项目准备启动检测工作。

　　CD4实验室网络

　　1、自治区CDC 10、贵港市CDC 2、百色市CDC 11、钦州市CDC 3、崇左市CDC 12、防城港市CDC 4、河池市CDC 13、北海市CDC 5、桂林市CDC 14、贺州市人民医院 6、柳州市CDC 15、广西龙潭医院 7、来宾市CDC 16、南宁市四医院 8、梧州市CDC 17、灵山县CDC 9、玉林市CDC 18、鹿寨县

　　谢谢!