实验九 血糖的测定与应用.ppt

　　实验九 血糖的测定与应用

　　1 实验目的

　　⑴ 掌握血糖的测定方法、原理及应用; ⑵ 了解血糖的正常值及糖饮食对血糖浓度的调节作用。

　　2 实验原理

　　⑴ 福林—马尔露斯(Folin-Malmors)超微量法：在热碱溶液中的葡萄糖可将高铁氰化钾还原为低铁氰化钾，后者再与硫酸高铁盐作用生成亚铁氰化铁(普鲁士蓝)，与同样处理的葡萄糖标准液进行比色，即可求出血糖含量。 其反应如下：

　　⑵ 葡萄糖试剂盒测定法：

　　血糖浓度是相对恒定的，这是由于体内存在着各种调节血糖浓度的生理机制。 饱食和大量食糖后大量葡萄糖进入血液，使之血糖浓度增高，糖原的合成速度随之增大，但血糖浓度不久即恢复到正常。 长时间运动中血糖也有下降现象，下降程度因人而异。如马拉松赛跑时，中途退场者多因血糖下降而被迫终止比赛，能坚持跑到底，成绩优异者，血糖不下降或下降很少，所以血糖是评定运动耐力素质，监控耐力训练的生化指标之一。

　　正常值： 3.89-6.11mmol/L (70-110 mg/dl) 单位换算：mg/dl× 0.0555 = mmol/L

　　3 实验器材与试剂

　　⑴ 器材 采血针、吸血管、超声清洗机、离心管、台式 离心机、试管架、水浴箱、可见光分光光度计、移液管

　　⑵ 试剂 ① 0.03 mol/L H2SO4 ② 1%钨酸钠 ③ 碱性铁溶液：铁氰化钾0.8g，无水碳酸钠2.0g，加 蒸馏水溶解并至200ml，贮于棕色瓶中。 ④ 酸性硫酸高铁铵溶液：称取硫酸高铁铵2.0g，溶于50ml蒸馏水中，加入85%磷酸20ml，然后用纯净蒸馏水定容到100ml。

　　⑤ 葡萄糖标准液 贮存液(10mg/ml)：称取纯无水葡萄糖1.00g用0.25%苯甲酸溶液溶解，倾入100ml容量瓶，最后用0.25%苯甲酸溶液稀释至刻度，摇匀，放冰箱保存。 标准糖应用液I(0.02mg/ml)：准确吸取贮存液0.2ml，置于100ml容量瓶中，加入0.25%苯甲酸液至刻度(用于标准管测定)。 标准糖应用液II(0.05mg/ml)：准确吸取上述贮存液0.5ml，置于100ml容量瓶中，用0.25%苯甲酸液稀释至刻度(作标准曲线用)。 0.25%苯甲酸溶液：称取苯甲酸2.5g，加入煮沸的蒸馏水1000ml中，使成饱和溶液，冷却后，取上清液备用。

　　4 实验方法与步骤

　　⑴ 福林—马尔露斯(Folin-Malmors)超微量法 ① 取样 两位同学一组，分别取指尖血20ul，室温静置，制备血清;采血后分别食用蔗糖100g及面包100g，30min后同上采血，制备血清。 ② 血液中葡萄糖的测定 在离心管中加入0.5ml(0.03mol/L)硫酸，取指尖血0.02ml加入硫酸液中，混匀后加1%钨酸钠溶液0.48ml，静置10min，离心5min(3000r/min)，取上清液0.5ml入测定管，按表3-9操作测定。

　　表3-9 单位：(ml)

　　注：180.2指葡萄糖相对分子质量;10：1L等于10dl 正常值： 80~120mg%，平均106mg%。

　　计算：

　　⑵ 试剂盒测定法：如：采用浙江东瓯生物工程有限公司生产的葡萄糖测定试剂盒，按其操作步骤略加改进。① 基本参数：方法：终点法;波长：500nm;比色光径：0.5cm或1cm;反应温度：37℃;反应时间：10min;标本/试剂：1:150。

　　混匀置37℃水浴箱中保温10min，500nm波长，以空白管调零，用小号比色皿装盛溶液，测定各管吸光度。

　　② 按表3-10操作： 表3-10 试剂盒操作表

　　③ 计算：

　　⑶ 标准曲线制法 标准曲线就是一系列不同浓度(含量)标准溶液的光密度值对其相应的浓度(含量)作图，所得的坐标曲线。 标准曲线使测定工作简便，当需要测定大批样品或多次测定时，制作标准曲线，可免去标准管和对每份样品的计算，只需作测得的各样品光密度数值，查标准曲线便可迅速得出该样品的浓度(或含量)。

　　按表3-11操作，并绘标准曲线。表3-11单位：(ml)

　　用光密度作纵坐标，葡萄糖浓度(mg%)作横坐标，将不同浓度的各标准管读数分别点在坐标纸上(内侧)，通过各点作一平滑曲线，在曲线上可查得测定管的血糖含量，如图3-4。

　　5 注意事项

　　⑴ 标准曲线要通过原点，因为空白管OD=0; ⑵ 标准曲线的斜率要适中，与横、纵轴成45°角为宜，这样误差小; ⑶ 要保持测定做标准曲线实验条件的一致性(分光光度计也要一样); ⑷ 加硫酸高铁铵溶液后静置1min的目的，是利用余热进行反应。若在室温较低的情况下作标准曲线，应静置10min才加4.5ml水，这样1管显色才充分。

　　6 思考题

　　⑴比较不同品种糖饮食前后血糖的变化，并作出相应解释。 ⑵用本实验方法测定血糖，应注意哪些因素方能获得准确的结果?