化妆品(Cosmetic)微生物.ppt

　　化妆品(Cosmetic)微生物

　　化妆品的种类 脸部 眉目 体用 手用化妆品 洗涤用品

　　化妆品生境的特点： 形式多样，原料多取自自然界：如植物、动物、滑石粉 营养物质少，低于体内和食品 本身是抗菌物质/加入抗菌剂/抑菌剂

　　污染化妆品的微生物的特点; 是自然界分布广泛的微生物 对营养要求极低 抵抗力比较强

　　化妆品中微生物的来源 一次污染：原料污染、生产工艺及用具污染、人员素质差导致体表及肠道微生物污染 二次污染：使用过程中污染

　　化妆品中微生物的种类和分布

　　种类 细菌： 球菌：葡萄球菌 杆菌：革兰氏阴性杆菌---大肠、沙、志、绿脓杆菌(自然界分布广，常导致烧伤感染、眼溃疡或失明、呼吸道感染) 革兰氏阳性杆菌---结核、白喉、类白喉(致结膜炎)、破伤风 霉菌与酵母：糖浆中的酵母引起变败

　　分布

　　化妆品种类不同，微生物的种类与数量不同：由污染源、营养物质、抗菌因素决定。如 动物原料----微生物多，且易检出沙门氏菌 植物原料----微生物多 糖和淀粉原料----微生物多

　　化妆品剂型不同，微生物的种类与数量不同? 化妆品基质不同，微生物的种类与数量不同。如基质为油膏类，对微生物的生长有抑制作用，且不同来源的油脂，对细菌的抑菌能力各异：豚脂、动物脂>凡士林>w/o>o/w>矿物油的白凡士林>液体石蜡。

　　化妆品中某些成分与染菌的关系

　　离子：

　　配制时注意离子的浓度与种类 K+、Na+、Ca2+、Mg2+等1价或2价阳离子物质为微生物所需的营养元素，可促进微生物的繁殖 Fe3+、Co2+、Pb2+、Al3+、Hg2+、Ag+等对微生物具有毒性作用，可抑制其生长 Zn2+、Cu2+、Fe2+等则是微生物所需的微量元素，当少量存在时可促进其生长

　　其它成分

　　金属络合剂：EDTA：加入后络合锌、铜、铁等微量元素，不利于微生物生长。 还原剂：如亚硫酸盐能抗氧化和抑制需氧菌生长

　　醇类：一元醇杀菌效果差;乙醇75%杀菌效果好，1%开始有抑菌作用，20%可完全防腐;二元醇以上，羟基数增加，杀菌效果降低;甘油40-50%可防腐;五、六元醇能促进细菌繁殖，如金葡可利用甘露醇。 植物挥发油：如薄荷、桉叶、桂皮油具有较强的抑菌杀菌作用

　　化妆品被微生物污染后的变化与危害

　　一是对化妆品质量的影响， 二是对人体健康造成危害

　　使物理性状的改变：色、香、味、粘度、透明性、均匀性，常伴有化学性质的改变，不能使用。 有效成分的破坏：微生物生长会破坏有效成分

　　产生毒素：致癌或致敏，如青霉素由音符青霉产生，化妆品中产生后长期使用会导致对青霉素过敏。 感染

　　化妆品微生物污染的危害举例

　　1967年Morse等报道了某医院护士所使用的加羊毛脂的护手霜，因被肺炎克雷伯菌污染而使13人被感染，其中l人因败血症死亡 化妆品皮肤病患病人数占全部接触性皮炎患者的16.5%，已成为一种常见的皮肤病。

　　裴晓方 四川大学 xxpeiscu@163.com

　　化妆品成品中的常见微生物

　　化妆品的微生物学检验

　　检验菌落总数与特定菌/控制菌(化妆品中不得检出的特定微生物) 化妆品中不得检出的特定菌是粪大肠、绿、金

　　中 华 人 民 共 和 国 行 业 标 准 化妆品微生物标准检验方法总则Standard methods of microbiological examination for cosmetics General rules

　　不同类型化妆品样品的检样制备

　　液体样品

　　水溶性的液体样品，可量取10ml加到90ml灭菌生理盐水中，如样品不少于10ml。仍按10倍稀释法进行。如为5ml则加45ml灭菌生理盐水，混匀后，制成1：10稀释液。， 油性液体。取样品10ml，先加5ml来菌液体石蜡混匀，再加10ml灭菌的吐温80，在40~44℃水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水75ml(在44~44℃水浴中预温)，在40~44℃水浴中乳化，制成1：10的悬液。

　　膏、霜、乳剂半固体状样品

　　亲水性的样品，称取10g，加到灭菌的带玻璃珠加有90ml灭菌生理盐水的锥形瓶中，充分振荡混匀，放32℃水浴静置15min。用其上清液作为1：10的稀释液。 疏水性的样品，称取10g，放到灭菌的研钵中，加10ml灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加10ml灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70ml灭菌生理盐水，在40~44℃水浴充分混合，制成1：10稀释液。

　　固体样品

　　称取10g，加到灭菌的生理盐水稀释瓶中，振荡混匀，使其分散混悬后，放30~32℃水浴中，15min后取出，充分振荡混合，再放到30~32℃水浴中静置15min，取上清液作为1：10的稀释液。 如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g样品加到90ml灭菌生理盐水，均质1~2min;疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品加到90MLSCDLP液体培养基，或1g样品加1ml灭菌液体石蜡、1ml灭菌吐温80、7ml灭菌生理盐水，均质3~5min。

　　机械：玻珠、乳钵、均质器 加热 稀释、乳化剂

　　常用防腐剂的中和剂

　　防腐剂 对羟基苯甲酸酯类(尼泊金酯) 布郎诺醇(Bronopol))(2-溴-2-硝基-1。3-丙二醇 苯甲酸 洗必泰 甲醛 六氯酚

　　中和剂 吐温-80 盐酸半光氨酸 吐温-80 吐温80+卵磷酯 胺离子 吐温-80

　　我国卫生部2003年1月1日起实施的《化妆品卫生规范》中对化妆品的微生物学质量规定如下：

　　1.眼部化妆品及口唇等粘膜用化妆品以及婴儿和儿童用化妆品菌落总数<500cfu/ml(g)。 2.其他化妆品菌落总数<1000 cfu/ml(g)。 3.每克或每毫升产品中不得检出粪大肠菌群、绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌。 4.化妆品中霉菌和酵母菌总数<100 cfu/ml(g)。

　　化妆品细菌总数测定Standard plate count

　　卵磷脂、吐温80营养琼脂 成分： 蛋白胨 ?????????????? 20g 牛肉膏 ???????????????????????????3g 氯化钠 ?????????????????????????? 5g 琼脂 ???????????????????????? ??? 15g 卵磷脂 ????????????????????????? 1g 吐温80 ????????????????????????? 7g 蒸馏水 ?????????????????? 1000ml 37℃培养48h 对照试验：化妆品的稀释液(特别是1:1O的稀释液)常带有化妆品颗粒，有时与菌落很难区分，为了避免与细菌菌落发生混淆，可作一个检样稀释液与琼脂混合的平板，不经培养放到4℃环境中，以便计数检样菌落时用作对照。

　　化妆品微生物标准检验方法绿脓杆菌 Standard methods of microbiological examination for cosmeticsPseudomonas aeruginosa

　　根据本菌生物学特征：革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42℃条件下生长等，可与类似菌相区别。

　　铜绿假单胞菌的检测

　　SCDLP增菌 十六烷三甲基溴化铵平板分离 革兰染色、氧化酶实验 绿脓菌素实验、明胶液化实验、42度生长实验、硝酸盐还原实验

　　培养基

　　十六烷三甲基溴化铵琼脂 具有较强的选择性和鉴别作用，除铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)和极少数假单胞菌及革兰氏阴性杆菌可以生长外，绝大部分革兰氏阴性杆菌，假单胞菌及革兰阳性菌的生长，完全受到抑制。因为绿脓杆菌具有可利用十六烷的溴化铵盐这一重要特性，故很多国家已普遍利用此特性分离该菌，证明效果很好。但往往出现无色素、菌落较小、无蔓延生长等现象，因此在选取菌落时须注意，以免漏检

　　乙酰胺琼脂培养基(Acetamide) 主要成分为乙酰胺 乙酰胺酶是绿脓杆菌特有的酶类。绿脓杆菌能分解乙酰胺，故在此培养基上能生长，而其他菌不生长。

　　检验报告

　　用十六烷三甲基溴化胺琼脂平板或乙酰胺琼脂平板分离的疑似绿脓杆菌菌落，经染色镜检为革兰氏阴性无芽胞杆菌，氧化酶阳性并产生绿脓菌色素的，应报告检出铜绿假单胞菌。 如果分离的疑似菌株为革兰氏阴性无芽胞杆菌、氧化酶试验阳性，不产生绿脓菌素，而能液化明胶，硝酸盐还原产气和42℃生长试验皆为阳性的，也应报告检出铜绿假单胞菌。

　　化妆品微生物污染的预防

　　一次污染：原料污染、生产工艺及用具污染、人员素质差导致体表及肠道微生物污染 二次污染：使用过程中污染

　　车间空气消毒净化 过滤 照射 化学消毒

　　洁净室(区)空气洁净度级别表

　　空气化学消毒

　　房屋经密闭后，对细菌繁殖体和病毒的污染，每立方米用15% 过氧乙酸溶液7 ml(1 g/m3)，对细菌芽胞的污染用20 ml(3 g/m3)，放置瓷或玻璃器皿中加热蒸发，薰蒸2 h，即可开门窗通风。或以2% 过氧乙酸溶液(8ml/m3)气溶胶喷雾消毒，作用30min～60min。

　　操作人员

　　对化妆品生产人员的健康状况进行监督。 直接从事化妆品生产的人员，必须每年进行健康检查，取得健康证后方可从事化妆品的生产活动。 凡患有手癣、指甲癣、手部湿疹、发生于手部的银屑病或者鳞屑、渗出性皮肤病以及患有痢疾、伤寒、病毒性肝炎、活动性肺结核等传染病的人员，不得直接从事化妆品生产活动。

　　1.掌心对掌心搓擦 2.手指交错掌心对手背搓擦 3.手指交错掌心对掌心搓擦

　　4.两手互握互搓指背 5.拇指在长中转动搓擦 6.指尖在掌心中摩擦 标准的洗手方法

　　常用手消毒剂

　　(1)醇类和胍类{醋酸氯己定等}复配的手消毒液。 (2)有效碘含量为5000mg/L的碘伏溶液。 (3)75%乙醇溶液或70%异丙醇溶液。 (4)氧化电位水。 (5)卫生行政部门批准用于手消毒的其它消毒剂。

　　手与皮肤消毒

　　用0.5% 碘伏溶液(含有效碘5 000 mg/L)或0.5%氯己定醇溶液涂擦，作用1 min～3 min。也可用75%乙醇或0.1%苯扎溴铵溶液浸泡1 min～3min。必要时，用0.2% 过氧乙酸溶液浸泡，或用0.2% 过氧乙酸棉球、纱布块擦拭。

　　手的采样

　　被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦 2 次(一只手涂擦面积约 30cm2)，并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入 10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。

　　物品和环境表面消毒效果的监测

　　采样方法:用 5cm×5cm 的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，采样面积≥100cm2，连续采样 4 个，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子 1 支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各 5 次，并随之转棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入 10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。 门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。

　　二次污染的预防

　　为防止化妆品在使用期因病原菌的污染而诱发商品变质及皮肤感染，必须防止二次污染。 消费者要洗净手后再用手指沾取化妆品，用后随时盖好 粉扑和毛刷要经常清洗，保持清洁干燥 尽量避免交叉感染在产品包装上使用难以混入细菌的容器，如手按的气压式细颈塑料瓶，用时不必启盖，不易污染微生物 应用防腐剂要适量

　　研究前景

　　微生物限度标准如何与国际标准接轨 控制菌种类和限量的研究 新方法和新技术的应用研究

　　药 品 微 生 物

　　药品生境的特征

　　药品种类繁多、剂型多样、成分差异大

　　含水量

　　酸碱度

　　渗透压

　　不同种类、不同剂型，其生境特征也不同

　　药品微生物污染的来源

　　原辅料

　　空气

　　用水

　　操作人员

　　生产设备

　　包装容器

　　——最主要来源

　　污染药品的常见微生物

　　细菌

　　放线菌

　　霉菌

　　酵母

　　原料来源、制作过程和生产工艺不同，不同的药品制剂所污染的微生物种类和程度也会不同。

　　药品分类

　　分类依据：

　　药品的用药途径和使用要求

　　分类结果：

　　指注射剂、输液剂及用于正常无菌体腔、烧伤、眼科外伤等用药制剂，要求达到无菌

　　(Gp:) 规定灭菌药品

　　(Gp:) 非规定灭菌药品

　　(Gp:) 药品

　　指各种口服制剂、一般外用制剂，允许存在一定数量的细菌，但对染菌数量和种类有相应的卫生标准

　　药品微生物的卫生学意义

　　引起药品变质

　　危害人体健康

　　全身感染

　　局部感染

　　肠道传染病及其它疾病

　　物理形状和外观的改变

　　产生有毒代谢产物

　　失去药用价值

　　药品卫生微生物检测

　　药品微生物检测的特殊性

　　生境的多样性和复杂性

　　微生物数量少，分布不均

　　微生物多为损伤菌

　　微生物消长的多变性

　　药品卫生微生物检测

　　药品微生物检测的内容

　　无菌检查

　　微生物限度检查

　　细菌内毒素、热原质的检查

　　无菌检查

　　含义：用于检查规定灭菌的 药品、医疗器具、原辅料及其它物品是否无菌的检验方法。

　　意义：是批准无菌产品放行检验或监管部门对无菌产品质量监督的项目之一。

　　方法：将一定量药品加入相应培养基，观察是否有菌生长。

　　硫乙醇酸盐培养基——30℃~35℃ 改良马丁培养基 ——23℃~28℃ 培养时间——14d

　　无菌检查的结果判定

　　药典规定，无菌检查结果不得复试

　　考虑抽样检查的局限性。

　　微生物限度检查

　　含义：用于检查非规定灭菌的 药品、原辅料受到微生物污染程度的一种检验方法。

　　意义：是体现药品卫生质量的一个重要依据;也是药品生产企业管理和质量体系评审的一种重要手段。

　　内容：包括细菌总数、霉菌和酵母总数以及控制菌检查

　　控制菌指非规定灭菌药品不得检出的细菌。

　　控制菌检查

　　我国药典选点的药品控制均有大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和梭菌属。

　　三项指标均符合，判为符合规定;任一项不符合即判为不符合。

　　微生物限度检查的结果判定

　　控制菌检查不能复试，按一次检查结果为准。

　　细菌总数和霉菌酵母总数不符合时，同批次产品独立复试2次，以三次结果的平均值报告。

　　细菌内毒素、热原质的检查

　　内毒素——鲎试验

　　热原质——家兔热原试验。

　　药品微生物学标准

　　规定灭菌药品——无菌

　　非规定灭菌药品——参见药典具体规定

　　生产用纯水

　　生产用纯水——小于100cfu/ml 注射用水 ——小于10cfu/ml

　　药品微生物污染及其预防

　　药品生产环境的管理

　　防止微生物污染的其它管理工作

　　操作人员的管理

　　仪器设备及用水管理

　　原料的管理

　　生产环境洁净度的控制及监测

　　药品生产质量管理规范(GMP)