PurLVS大体积病原浓缩系统.ppt

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1615251280解决。

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　　标题： PurLVS 大体积病原浓缩系统

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　　1988年上海30万人暴发甲型肝炎病毒感染，由于食用遭甲型肝炎病毒污染水体中养殖的毛蚶造成; 1991印度的坎普尔由于使用了被戊型肝炎病毒污染的饮用水造成7.9万人感染戊型肝炎; 2007年广东省东莞市一起173例不明原因腹泻流行，经调查证实为诺如病毒污染饮水所致; 2014年浙江嘉兴部分学校因不洁桶装水感染诺如病毒爆发，导致500人产生腹泻症状; 近年来屡见饮水或者食品受到肠道病毒污染引起肠道传染病爆发的报道。

　　背景

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　　水源性病原体分布

　　(脊髓灰质炎病毒)

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　　水源性病毒检测现状

　　需要检测的水源性病毒种类较多：如脊髓灰质炎病毒、诺如病毒、轮状病毒、甲型肝炎病毒、柯萨奇病毒等。细胞培养是病毒检测的传统方法，但存在操作繁琐、检测周期长等缺点，而且有些病毒如诺如病毒很难培养，HAV无细胞病变等特点。往往是大体积液体样品，前处理难样品体积庞大，无法进行直接检测操作 ——需要浓缩至小体积目标物含量低，达不到传统技术检测的阈值——需灵敏度高的方法目标物浓缩检测后无法保持生物学活性 ——需后续培养或检测浓缩目标物后，回收操作繁琐，回收效率低——无法揭示真实情况

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　　水质中病毒的质量控制没有建立常规的病毒检测方法，原因主要在于缺乏有效、简单、快速、可靠的技术用于浓缩和检测这些病原。实时荧光PCR等分子检测方法由于其高度灵敏、特异的特点, 是目前用于检测水样本中病毒的最有效、快速的方法。脊髓灰质炎病毒：细胞培养、显微镜观察、实时荧光PCR检测由于水环境中存在的致病病毒量极低，能否将大量水体中极其微量但却足以使人致病的病毒粒子(几十个)有效的浓缩，成为将这些分子方法成功应用的关键点。

　　水源性病毒检测

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　　其他占位符：病毒浓缩系统细菌浓缩系统真空泵过滤系统蠕动泵过滤系统

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　　其他占位符：可处理样本类型 ①桶装水、瓶装水。 ②河道水、湖泊水。 ③食品表面洗脱水、食品组织研磨液洗脱水。 ④生活污水。样本预处理对于生活污水、河道水、江河湖海等环境水样，往往含有明显的杂质颗粒，需对杂质进行处理，如离心、纱布预过滤等操作，待水样无明显杂质后，才可以使用本系统进行病毒浓缩检测，但处理总体积不超过2 L。

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　　浓缩能力

　　富集目标

　　水样本中存在的各种病毒和细菌

　　浓缩水样体积多达20升，满足检测要求; 浓缩速度最高1.2L/min，缩短浓缩时间; 浓缩倍数高，最高可达1万倍; 富集得到的浓缩液既可以用于核酸提取和PCR检测，也可以用于病毒培养。

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　　标题：操作过程

　　其他占位符： 1、样本前处理瓶装水、桶装水等水样：无明显杂质颗粒，直接按照SOP操作; 生活污水、江河湖海等环境水样：有明显杂质颗粒，需要先去杂质(离心或预过滤)，然后按照SOP操作; 2、样本过滤——vs 二次浓缩：节省过滤时间，提高效率一次过滤，根据水样量使用不同过滤方式;

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　　3、过滤膜破碎洗脱——灵活处理，可培养可检测核酸 (一)细胞培养 (二)核酸提取+RT-PCR检测

　　标题：操作过程

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