IL-27转染人食管鳞癌细胞抗肿瘤效应及其机理研究.ppt

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　　IL-27转染人食管鳞癌细胞抗肿瘤 效应及其机理研究

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　　正文： 我国是食管癌的高发区，世界上约50%的食管癌发生在中国，到医院就诊的患者中95%为中晚期。 尽管通过手术、化疗和放疗使食管癌的生存率得到很大提高，平均5年生存率仍为10%。 近年来，肿瘤生物治疗受到了人们的关注，并逐渐成为肿瘤的第四种治疗方法。

　　引 言

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　　正文： IL-12 family members：IL-12, IL-23 and IL-27 is primarily produced from activated antigen presenting cells (monocytes, macrophages and dendritic cells) whereas IL-35 is produced by regulatory T cells. These cytokines are all composed of two subunits, a helical subunit (IL-12p35、IL-23p19、IL-27p28、IL-35p35) and a soluble cytokine receptor-like subunit (IL-12p40、IL-23p40、IL-27EBI3、 IL-35EBI3).

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　　引言

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　　正文： 本研究旨在探讨IL-27基因转染对人食管癌细胞在裸鼠体内的抗肿瘤效应及其对免疫功能的影响，探讨其抗肿瘤作用机制。

　　标题： 目 的

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　　细胞转染

　　(Gp:) 逆转录 病毒载体 (LXSN/IL-27)

　　(Gp:) Ψ2

　　(Gp:) 病毒

　　(Gp:) PA317

　　(Gp:) polybrene

　　(Gp:) 病毒

　　(Gp:) polybrene

　　(Gp:) Eca109

　　(Gp:) Eca109/ IL-27

　　(Gp:) Ψ2/ IL-27

　　(Gp:) PA317/ IL-27

　　(Gp:) G418

　　(Gp:) G418

　　(Gp:) Eca109/ LXSN

　　(Gp:) G418

　　(Gp:) Lipofectamine

　　(Gp:) ……

　　(Gp:) 方法

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　　Eca109/IL-27 Eca109/LXSN Eca109细胞

　　1×107个细胞/只

　　皮下接种

　　腹腔接种

　　成瘤性、生存期

　　肿瘤体积

　　建立动物模型

　　(mm3)=长径×短径2×1/2

　　(Gp:) 方法

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　　(Gp:) 肿瘤组织

　　(Gp:) 脾

　　(Gp:) RNA

　　(Gp:) RT-PCR

　　(Gp:) T-bet, IL-12Rb2, TNF-a, IL-1b and IL-6

　　(Gp:) 免疫组化

　　(Gp:) NK

　　(Gp:) ELISA

　　(Gp:) IFN-g

　　(Gp:) NK杀伤活性

　　(Gp:) LDH

　　标题： IL-27对免疫调节作用研究

　　(Gp:) 方法

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　　正文： Eca109/IL-27细胞的培养上清中检测到IL-27，其含量为153.73±7.0pg/ml。而在Eca109/LXSN细胞和野生型Eca109细胞的培养上清中未检出IL-27。

　　(Gp:) 结果

　　蛋白水平鉴定转染成功

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　　Fig.1 Expression of IL-27 EBI3 and p28 gene in different cells dected by RT-PCR. M: DNA marker; A:Eca109/IL-27 cells; B: Eca109/LXSN cells; C: Eca109 cells.

　　基因水平鉴定转染成功

　　(Gp:) EBI3 (706bp)

　　(Gp:) b-actin

　　(Gp:) 500bp

　　(Gp:) M A B C M A B C

　　(Gp:) P28 (231bp)

　　(Gp:) 500bp

　　(Gp:) b-actin

　　(Gp:) 结果

　　IL-27基因表达

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　　(Gp:) *

　　(Gp:) *

　　Fig.2 Tumor’s growth in nude mice inoculated subcutaneously with different tumor cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.01

　　IL-27对肿瘤生长的影响

　　生存期 56±4day 54±3day 97±4day *

　　(Gp:) 结果

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　　标题： Fig.3 Infiltration of NK cells in tumor tissues from nude mice after inoculation with different cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.05

　　(Gp:) Eca109/IL-27 Eca109/LXSN Eca109

　　(Gp:) 12.6±1.2% * 8.4±0.9% 7.8±0.7%

　　IL-27对移植瘤组织NK细胞浸润数量的影响

　　(Gp:) 结果

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　　(

　　*

　　(Gp:) (

　　(Gp:) *

　　(Gp:) *

　　标题： Fig.5 Cytotoxic activity of spleen cells from nude mice after inoculation different tumor cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.05

　　IL-27对荷瘤裸鼠脾细胞免疫功能的影响

　　(Gp:) 结果

　　(Gp:) *

　　Fig.4 IFN-g production from spleen cells after inoculation different tumor cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.01

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　　标题： Fig.6 Gene expression in tumor tissues after inoculation different tumor cells detected by RT-PCR. A: Eca109; B: Eca109/LXSN; C: Eca109/IL-27

　　IL-27对移植瘤组织中细胞因子表达的影响

　　(Gp:) 结果

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　　其他占位符： 本研究结果表明，接种IL-27转染细胞组裸鼠移植瘤生长缓慢、裸鼠生存期延长，移植瘤组织中仍有IL-27的表达，表明IL-27在裸鼠体内产生了抗肿瘤作用。 IL-27受体高表达于NK细胞，因而我们进一步检测了移植瘤组织中NK细胞浸润的数量。结果表明，接种IL-27转染细胞组移植瘤组织间质中NK细胞浸润数量增高，效应分子IFN-g产生增多，杀伤活性增强。说明IL-27不仅可以募集NK细胞而且能够增强其生物学效应。

　　讨 论

　　(Gp:) 讨论

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　　其他占位符：

　　研究结果显示接种Eca109/IL-27细胞组移植瘤组织中T-bet和IL-12Rb2基因的表达水平增高。IL-27增强NK细胞产生IFN-g的分子基础是IL-27与受体结合后活化STAT1，增加转录子T-bet表达，进而作用于靶基因促进IL-12Rb2和IFN-g等的转录。因此我们在分子水平上证明IL-27能够促进NK细胞产生IFN-g 。

　　(Gp:) 讨论

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　　其他占位符： 接种Eca109/IL-27细胞组移植瘤组织中Thl类细胞因子TNF-a、IL-1b和IL-6基因的表达亦升高。TNF-a在介导肿瘤细胞凋亡中起重要作用，在Thl型反应中具有重要辅助作用，IL-1b不仅对肿瘤细胞周期有阻滞作用，对NK细胞产生IFN-g还起到促进作用，而IL-6在肿瘤基因治疗研究中的作用已经得到公认，这些细胞因子的表达都直接或间接与IFN-g产生有关。 因而，IL-27能够增强荷瘤裸鼠免疫功能而发挥抗肿瘤效应。

　　(Gp:) 讨论

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