实验四 嗜酸性粒细胞计数.ppt

　　实验四 嗜酸性粒细胞计数

　　17级医学检验技术 xxx

　　概述 嗜酸性粒细胞(eosinophil,E)是白细胞的组成部分，来源于骨髓的造血干细胞。嗜酸性粒细胞具有杀伤细菌、寄生虫的功能，也是免疫反应和过敏反应过程中极为重要的细胞。嗜酸性粒细胞可以释放颗粒中的内容物，引起组织损伤，促进炎症进展。 血液中嗜酸性粒细胞的数量表现为昼夜周期性波动。清晨细胞数减少，午夜时细胞数增多。

　　【实验目的】 掌握嗜酸性粒细胞直接计数的方法。 【实验原理】 采用嗜酸粒细胞稀释液，将血液定量稀释，并破坏红细胞和大部分其他白细胞，使嗜酸性粒细胞饭颗粒着色，充入计数室;计数一定范围内嗜酸性细胞数，然后计算成每升血中嗜酸性粒细胞数。

　　嗜酸性粒细胞计数

　　改良牛鲍氏计数板

　　采用推压法从计数板下缘向前平推血盖片，将其盖在计数池上

　　血盖片

　　3mm

　　1mm

　　每个大方格面积1mm×1mm=1mm2 每个大方格容积 1mm2×0.1mm= 0.1mm3(μl)

　　【实验材料】 1、器材： (1)显微镜改良牛鲍血细胞计数板、盖玻片、绸布。 (2)试管架试管、刻度吸管、微量吸管、玻璃棒。 (3)采血针、消毒棉球、干脱脂棉。 2、标本： 毛细血管血或EDTA抗凝新鲜全血。:

　　3、试剂： (1)伊红-丙酮稀释液:20g/L伊红水溶液5ml、丙酮5ml、蒸馏水90ml。 (2) Hinkelman稀释液:伊红0.2g 95%苯酚0.5ml、40%甲醛0. 5ml、蒸馏水加至100ml。 (3)乙醇伊红稀释液:20g/L伊红水溶液10ml、95%乙醇30ml、甘油10ml碳酸钾1. 0g、枸橼酸钠0.5g、蒸馏水加至100ml。

　　(4)皂素-甘油稀释液:20g/L伊红水溶液10ml、皂素0. 3g、甘油10ml、尿素10. 0g、氯化钠0.9g、蒸馏水加至100ml。 (5)溴甲酚紫稀释液:溴甲酚紫25mg、蒸馏水50ml。 (6)固绿(FCF)稀释液:①甲液:20g/L固绿20ml、丙酮30ml、EDTA- Na 0. 2g、蒸馏水加至500ml。②应用液:无水乙醇27ml、甘油10ml、 碳酸钾1. 0g、草酸铵0.2g,用甲液加至100ml，过滤备用。

　　【实验操作】

　　1.加稀释液

　　2.加血

　　4.准备计数板

　　5.充池

　　6.计数

　　用1ml加样枪吸取嗜酸性粒细胞稀释液0.38ml至标记好的小试管中

　　用微量吸管一次吸取抗凝血到20μL刻度线处，用纱布拭去管外余血，将血轻轻加至嗜酸性粒细胞稀释液底部并吸取上清液漱洗微量吸管3次，注意不能冲浑稀释液

　　3.混匀

　　上下颠倒混匀试管内液体，待红细胞完全溶解，注意不能产生大量气泡

　　将计数板计数区域清洗干净，擦干，采用“推式”法 在计数板上加盖血盖片，备用

　　上下颠倒混匀小试管中的细胞悬液，用微量吸管吸取细胞悬液1滴，采用悬滴法滴加在计数板与血盖片交界的斜面处，利用虹吸作用让细胞悬液充满计数池，静置2～3min，待嗜酸性粒细胞下沉

　　在暗视野下，用10倍镜计数2个计数室十个大方格的嗜酸性粒细胞数，对压线细胞按“数上不数下、数左不数右”的原则进行计数

　　7.计算 嗜酸性粒细胞数/L=N/10×10×20×106=N/50×109 注公式中: N： 10个大方格内白细胞总数; /4: 为每个大方格(即0.1μL)内白细胞平均数; ×10: 每个大方格容积为0.1μL，换算成1.0μL; ×20: 血液稀释倍数; ×106:由1μL换算成1L。 参考区间：(0.02—0.52)×109/L

　　9. 显微镜复位 复位指显微镜物镜两个低倍镜4×、10×镜头呈“八字”形对准通光孔，载物台降到最低，聚光器调到最低，光源调到最暗，关掉显微镜电源。

　　10. 清理工作台 用过的一次性试管、微量吸管放入锐器盒，棉球、纱布等放入普通污物缸，白细胞稀释液倒入废液缸，计数板、血盖片放入回收盘中，其它物品放到指定位置，最后用稀释的84擦干净桌面，实验后消毒双手。

　　【注意事项】

　　1.器材要求：所用器材必须是中性的，吸管、试管、计数板和盖破片均应洗涤干燥后方可使用。 2.固定检测时间：嗜酸性粒细胞计数最好固定标本的采集时间(上午8时或下午3时)，以免受日间生理变化的影响。 3.计数误差：造成白细胞计数误差的因素,在嗜酸性粒细胞计数时均应注意。

　　【注意事项】

　　4. 保护细胞 (1)嗜酸性粒细胞稀释液中的乙醇、丙酮等为嗜酸性粒细胞的保护剂，若嗜酸性粒细胞被破坏，可适当增加其用量;若中性粒细胞破坏不全，则可适当减少其用量。 (2)因嗜酸性粒细胞易于破碎，混匀不宜太过用力;若使用含甘油的稀释液，因黏稠度大，要适当延长混匀时间。

　　【注意事项】

　　5.寻找计数区域：在显微镜光线不要太强的情况下，仔细调整显微镜的细螺旋，寻找计数区域。 6.计数时间：计数应在血液稀释后1小时内完成,否则嗜酸性粒细胞会逐渐溶解破坏，造成结果偏低。 7.鉴别细胞：注意与残留的中性粒细胞区别，以免误认。中性粒细胞一般不着色或着色较浅，胞质颗粒细小或不清。

　　增高：见于慢性肾上腺皮质功能减退、寄生虫病、变态反应性疾病(如荨麻疹、支气管哮喘等)、皮肤病(如湿疹、天疱疮、银屑病等)、肺嗜酸性粒细胞增多症、慢性粒细胞白血病以及何杰金病等。 减少：见于肾上腺皮质功能亢进、再生障碍性贫血、急性心肌梗死、严重烧伤、大手术后，患大叶性肺炎、伤寒和猩红热等疾病严重时。

　　临床意义