病理组织切片制作技术.ppt

　　病理组织切片制作技术

　　实验内容

　　掌握组织材料的取材、固定、脱水、透明、包埋、切片、烤片、脱蜡、染色及封固的基本操作。

　　一、取材及固定

　　(一)取材注意事项： 1、材料新鲜 2、组织块力求小而薄 3、勿使组织块受挤压 4、尽量保持组织的原有形态 5、熟悉取材部位

　　(一)取材注意事项：

　　6、选好组织块的切面 7、保持材料的清洁 8、切除不需要的部位

　　(二)固定及目的：

　　应用化学试剂使组织或细胞中的无机成分和有机成分凝固或沉淀，以保持其生活状态的过程称为固定。

　　固定液是10%福尔马林溶液(4%甲醛溶液)，固定24小时以上。

　　固定的目的

　　1、迅速阻止组织、细胞死后变化，防止自溶与腐败，使之尽量保持生前的状态与结构。 2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持其原有状态。 3、使组织内各种物质成分产生不同的折光率，以便染色后易于鉴别和观察。 4、使组织块硬化，便于制作薄片。

　　固定的注意事项

　　1、组织块不宜大，厚度小于5mm，长宽也应小于15×15mm。 2、固定液与组织块的比例应大于10：1。 3、软组织或较大组织块可先经2-3小时固定后再修整成小块，重新投入新配制的固定液中继续固定。 4、肠道可在浆膜面贴上一层厚纸，以防固定组织变形。

　　二、固定后处理及切片

　　(一)、洗涤与修切 (二)、脱水与透明 脱水：将组织块内水分置换的过程。 透明：乙醇和石蜡不互溶，最常用的透明剂是二甲苯。既能溶于脱水剂又能溶于包埋剂(石蜡)，透明必须适度 。

　　50%乙醇30-60min 70%乙醇1-2小时或过夜 80%乙醇1-2小时 95%乙醇1-1.5小时 100%乙醇30min 100%乙醇20min 1：1无水乙醇：二甲苯20min 二甲苯10-30min

　　(三)、浸蜡与包埋

　　52-58℃石蜡，浸蜡的全过程在60℃的温箱中进行。 1：1二甲苯：石蜡30min 石蜡一30min 石蜡二30min 石蜡三30min

　　(四)切片、粘片

　　1、切片前处理及切片 2、载玻片处理 3、粘片(展片) 4、烤片

　　三、脱蜡和染色

　　(一)、脱蜡 1、二甲苯Ⅰ5-10min 2、二甲苯Ⅱ1-2min 3、1：1二甲苯：乙醇(冬天20min)5min 4、无水乙醇、 95%、80%、 70、 50%梯度乙醇每级1-2min 5、蒸馏水1-2min

　　(二)、染色(HE染色法)

　　6、苏木素染液5～15min 7、蒸馏水(洗去多余的染液) 8、分色:1%盐酸-70 %乙醇分色30-60sec 8、蓝化:自来水冲洗(碱化，核蓝色)15-20min 9、蒸馏水(洗去多余的碱) 1-2min 10、逐级入50%、70%、85%乙醇，每级1-2min 11、伊红- 95%乙醇染液15sec～2min 12 、95%、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ逐级脱水，每级 1-2min 13、1：1无水乙醇：二甲苯 、二甲苯 Ⅰ 、二甲 苯Ⅱ 各 5min

　　四、封固

　　滴加中性树胶，加盖玻片封片。

　　五、光镜观察

　　放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍

　　放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍

　　肺毛霉病病理HE染色

　　肺曲霉球菌丝45度分枝HE染色

　　概括主要流程

　　取材 固定 脱水 透明 包埋 切片 封固 染色 脱蜡 烤片

　　Thank you!