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细菌的染色.ppt

细菌的染色.ppt
PPT课件名称:细菌的染色.ppt 时 间:2023-01-31 i d:10528 大 小:1.57 MB 贡 献 者:lili7804 格 式:.rar 点击下载
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细菌的染色.ppt

  1张

  标题: 实验 细菌的染色

  细菌的单染色法 细菌的革兰氏染色 芽孢染色 荚膜的染色

  2张

  1、学习微生物涂片、染色的基本技术,掌握细菌的简单染色法。 2、初步认识细菌的形态特征。 3、学习细菌的革兰氏染色原理和方法 4 、了解细菌的特殊形态结构: 芽孢、荚膜的染色 5、学习训练无菌操作技术。

  实验目的

  3张

  ?细菌细胞微小,透明,不易观察,需染上颜色。 ? 简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法,适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。 ? 常用碱性染料进行简单染色,因为在中性、碱性或弱酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,而碱性染料在电离时,其分子的染色部分带正电荷,因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色,经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比,在显微镜下更易于识别。

  实验原理

  1 细菌的简单染色

  4张

  常用作简单染色的染料有:美蓝、结晶紫、碱性复红等。 ? 当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时,细菌所带正电荷增加,此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。

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  1、菌种

  枯草芽孢杆菌12~18h培养物 金黄色葡萄球菌24h培养物

  2、染色剂

  吕氏碱性美蓝染液 齐氏石碳酸复红染液

  实验材料

  6张

  涂片

  干燥

  固定

  染色

  水洗

  干燥

  镜检

  操作步骤

  四、实验步骤

  无菌操作

  7张

  1、涂片

  取两块载玻片,各滴一小滴(或用接种环沾取)生理盐水(或无菌水)于玻片中央,用接种环以无菌操作从枯草杆菌(1d)斜面上挑取少许菌苔于水滴中,混合并涂成薄膜。 如用菌悬液或液体培养物,可用接种环挑取1-2环直接涂于载玻片上。 Notes: 1) 载玻片要洁净无油迹 2)滴生理盐水和取菌不宜过多 3)涂片要涂抹均匀,不宜过厚。

  操作步骤(continued)

  8张

  菌悬液

  涂片

  干燥

  滴加无菌水

  固定

  取菌苔

  涂片

  操作步骤(continued)

  9张

  3、固定

  固定的目的: 1)使细胞质凝固,以固定细胞形态; 2)并使菌体牢固地附着在载玻片上。

  固定方法: 热固定:涂面朝上,通过火焰数次 注意:温度不宜过高,以玻片背面不烫手为宜, 否则会改变甚至破坏细胞形态

  操作步骤(continued)

  2、干燥 室温自然干燥

  10张

  4、染色

  ◇ 将玻片平放于玻片搁架上,滴加染液于涂片上(染液刚好覆盖涂片薄膜为宜)。 ◇ 美蓝染色1-2min;石碳酸复红染色约1min。

  操作步骤(continued)

  5、水洗

  倒去染液,用洗瓶(内装自来水)轻轻冲洗,直至涂片上流下来的水无色为止;染色废液收集在废液缸中。 Note: 水洗时,不要直接冲洗涂面,而应使水从载玻片的一端流下,水流不宜过急,以免涂片薄膜脱落。

  11张

  7、镜检

  细菌个体微小,一般使用油镜观察细菌个体形态。

  操作步骤(continued)

  6、干燥

  自然干燥或用电吹风吹干,也可用吸水纸吸干。

  12张

  7、镜检(continued)

  Notes: 必须等涂片完全干后才可滴加香柏油 油镜使用完毕,切记按规定步骤擦干净,否则可能损害镜头

  3)擦油镜镜头方法:分三步 A)先用擦镜纸揩去镜头上的香柏油 B)从双层瓶的下层沾少许二甲苯滴在另一片擦镜纸上 ,擦拭镜头; C)再用一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯。

  操作步骤(continued)

  13张

  标题: 2、革兰氏染色

  正文: 单染色法:只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况,但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。 复染色法:用两种或两种以上染色液进行染色,有协助鉴别微生物的作用,故也称鉴别染色法。常用的有: 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、荚膜染色法等。

  14张

  正文: 革兰氏染色(Gram stain) 1984年,丹麦医生Gram采用革兰氏染色法细菌细胞壁区分为两种类型:革兰氏阴性(G+)和革兰氏阳性(G-) 革兰氏染色步骤: 1)结晶紫初染;2)碘液媒染; 3)酒精脱色; 4)番红复染

  15张

  G﹢菌:细胞壁厚,肽聚糖网状分子形成一种透性屏障,当乙醇脱色时,肽聚糖脱水而孔障缩小,故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。

  Gˉ菌:肽聚糖层薄,交联松散,乙醇脱色不能使其结构收缩,其脂含量高,乙醇将脂溶解,缝隙加大,结晶紫-碘复合物溶出细胞壁,番红复染后呈红色。

  实验原理

  16张

  标题: 细菌的特殊形态结构

  正文: 芽孢:休眠体,不利环境下产生,耐受各种极端环境。 荚膜:多糖,包裹在菌体外围,保护菌体

  17张

  标题: 实验材料

  正文: 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌(2d)、胶质芽胞杆菌 革兰氏染色液一套

  18张

  标题: 实验步骤

  正文: 革兰氏染色 枯草杆菌的芽孢染色 荚膜的染色 绘图、写实验报告

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  标题: 革兰氏染色的步骤

  正文: 1. 涂片 2. 初染:在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液,染1分钟,倾去染液,流水冲洗至无紫色。 3. 媒染:先用新配的路哥氏碘液冲去残水,而后用其覆盖涂面1分钟,后水洗。 4. 脱色:除去残水后,滴加95%酒精进行脱色约15-20秒,后立即用流水冲洗。 5. 复染:滴加番红染色液,染3分钟,水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检:观察染色结果并绘图。

  20张

  Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells.

  Figure 2 - Gram stain of Gram – E. coli cells

  21张

  标题: 3 枯草杆菌芽孢的染色

  1、制备菌液:加2-4滴蒸馏水于小试管中,用接种环从斜面挑取菌体4环于试管中充分混匀。 2、加染色液:加孔雀绿3滴于1.5ml 离心管中。 3、加热:沸水浴,15-20分钟。 4、涂片:用接种环从离心管中取一环菌涂于一干净载玻片上,制成涂片。 5、干燥、火焰固定 6、水洗:用水洗至流出的水中无绿色为止。 7、复染:加复红染色1-2分钟。水洗,吸水纸吸干。 8、镜检:10x ,40x 、100X(油镜)观察。

  22张

  标题: 4细菌荚膜的染色

  荚膜

  负染色法: 1、制片:取洁净的载玻片一块,加一滴黑墨水,取少量的菌体放入墨水滴中混匀并涂片。 2、刮片:另取一载玻片,以三十度角将其边缘浸入黑素中向右端拖动,将黑素涂成一薄层。 3、镜检:10x ,40x 物镜观察(注意物镜不要接触黑素,不要用油镜观察)

  23张

  标题: 本实验安排

  正文: 简单染色:枯草芽孢(1d)。 革兰氏染色:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、本人斜面菌株。 荚膜染色:胶质芽孢杆菌。 芽孢染色:枯草芽孢(2d) 另外,每大组选两人从斜面挑取枯草芽孢(2d)于离心管,水浴锅中煮沸。

  每人

  24张

  标题: 思考题

  正文: 简单染色: (1) 你认为制备细菌染色标本时,尤其应该注意哪些环节? (2) 如果你的涂片未经热固定,将会出现什么问题?如果加热温度过高、时间太长,又会怎样呢? 革兰氏染色: (1) 你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?其中最关键的环节是什么? (2) 现有一株细菌宽度明显大于大肠杆茵的粗壮杆菌,请你鉴定其革兰氏染色反应。你怎样运用大扬杆菌和金黄色葡萄球菌为对照菌株进行涂片染色,以证明你的染色结果正确性。 (3) 进行革兰氏染色时,为什么特别强调菌龄不能太老,用老龄细菌染色会出现什么问题?

  25张

  标题: 思考题

  正文: 荚膜染色法: (1) 通过荚膜染色法染色后,为什么被包在荚膜里面的菌体着色而荚膜不着色? 芽孢染色法: (1) 说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能否观察到细菌的芽孢?

  26张

  标题: 思考题

  正文: 芽孢染色法 (1) 说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能否观察到细菌的芽孢? (2) 若涂片中观察到的只是大量游离芽孢,很少看到芽孢囊及营养细胞,你认为这是什么原因?

  27张

  本次实验课结束 请确保油镜头擦拭干净! 下次实验再见!

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