消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全.ppt

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　　标题： 第3章

　　副标题： 消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全

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　　标题： 消毒灭菌常用术语

　　正文： 灭菌(sterilization)：杀灭物体上所有微生物 的方法。包括芽胞在内的全部病原和非病原微生物。 消毒(disinfection)：杀死物体上或环境中的 病原微生物的方法。并不一定能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。 防腐(antisepsis)：防止或抑制皮肤表面细菌 生长繁殖的方法。 清洁(cleaning)：是指通过除去尘埃和一切污 秽以减少微生物数量的过程。 无菌(asepsis)和无菌操作：无菌是无活菌的 意思，多是灭菌的结果。防止细菌进入人体 或其它物品的操作技术，称为无菌操作。

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　　标题： 第二节 消毒灭菌的方法

　　正文： 一、物理消毒灭菌法 (一)热力灭菌法 原理：多数无芽胞细菌经55-60℃作用30-60min后死亡。湿热80℃经5-10min可杀死所有细菌繁殖体和真菌。 分类：干热灭菌法、 湿热灭菌法

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　　干热灭菌法

　　焚烧：直接点燃或在焚烧炉内焚烧。是彻底的灭菌方法。适于病理性废弃物品、动物尸体。 烧灼：直接用火焰灭菌。适于接种环、试管口灭菌。 干烤：利用干烤箱灭菌，160℃2h、171 ℃1h、121 ℃ 16h ，适于玻璃器皿、瓷器等。 红外线：1-10?m波长最强，但只在照射 到的物体表面产生热效，不能 使物体均匀加热。适于医疗器械的灭菌。

　　(Gp:) 脱水干燥，使大分子变性

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　　标题： 湿热灭菌比干热效果好

　　正文： 1. 湿热穿透力比干热大，可使被灭菌物品内部温度迅速上升。 2. 湿热灭菌时，菌体蛋白质较易凝固。湿热灭菌时，菌体吸收水分，蛋白质含水愈多，凝固所需温度降低。 3. 湿热蒸气可放出潜热，这种潜热迅速提高被灭菌物体的温度 。

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　　标题： 湿热灭菌法

　　正文： 1. 巴氏消毒法：用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物，保持物品中不耐热成分不被破坏。61.1~62.8℃30min或71.7℃15~30s，一般用于酒类、牛乳等的消毒。 2. 煮沸法：100℃5min杀灭繁殖体，1-2h杀灭芽胞，加入2%的碳酸氢钠，即可提高沸点达105 ℃，促进芽胞的杀灭，防止金属器皿生锈，一般用于食具、刀剪、注射器的消毒。

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　　标题： 湿热灭菌法

　　正文： 3. 流动蒸汽消毒法：常压蒸汽消毒法，利用1个大气压下100 ℃ 的水蒸气进行消毒。100℃15～30min杀灭繁殖体，但芽胞不被全部杀灭。蒸笼同理。 4. 间歇蒸汽灭菌法：利用反复多次的流动蒸气间歇加热以达到灭菌目的。 100℃加热15～30min，37℃过夜，次日再蒸1次，连续三次，用于不耐高热含糖、牛奶等培养基。

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　　标题： 5.高压蒸汽灭菌法

　　正文： 压力103.4kPa(1.05kg/cm2)蒸汽压下，温度达121.3℃，15～20min，杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物。一般培养基、生理盐水、手术敷料等物品。 利用水的沸点随水蒸汽压力的增加而上升的原理

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　　标题： 高压蒸汽灭菌器

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　　标题： (二)、辐射杀菌法

　　正文：

　　1.紫外线 波长240～300nm的紫外线具杀菌作用。以265-266nm最强，此波长的紫外线易被细胞中核酸吸收

　　(Gp:) 杀菌机理：

　　(Gp:) 诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了DNA的复制与转录，导致细菌变异或死亡。

　　紫外线灯距离照射物以不超过1.2 m为宜。

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　　空气消毒 手术室、传染病房、细菌实验室 不耐热物品的表面消毒

　　紫外线穿透力较弱，对皮肤、眼睛有损伤

　　特点：

　　应用范围：

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　　杀菌机理：

　　应用范围：

　　2.电离辐射

　　主要包括β射线和 ?射线：60Co-?

　　干扰DNA合成，破坏细胞膜，引起酶系统紊乱，产生游离基等

　　一次性医用塑料制品的消毒 食品、药品、生物制品的消毒，不破坏其营养成分

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　　3.微波

　　波长1-1000mm的电磁波

　　杀菌机理

　　热效应，但不均匀，灭菌效果不可靠

　　应用范围

　　食品、非金属器械、检验室用品、无菌室和病室中食品用具、药杯及其他物品的消毒。

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　　标题： (三)、滤过除菌法

　　正文：

　　机制

　　用物理阻留的方法去除液体或空气中的细菌，以达到无菌目的。

　　用途

　　主要用于不耐高温无菌的血清、毒素、抗生素、药液的除菌 。

　　特点

　　仅能除去细菌，不能去除病毒、支原体、衣原体和有些L型细菌等。

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　　标题： 滤菌器的种类

　　正文： 薄膜滤菌器：孔径0.45 ?m 以下 玻璃滤菌器 石棉滤菌器 素陶瓷滤菌器

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　　空气除菌采用生物洁净技术 将空气气流通过孔径<0.2 ?m 的高效过滤装置以除去细菌和带菌尘埃 层流空气：经高度净化的空气形成一种细薄的气流， 以均匀的速度向同一方向输送，均匀分布于室内， 不产生涡流，聚集尘埃，通过回风口把它带出房间。 空气持续向外流通，使室内维持正压，可防止相邻房 间的细菌侵入。 生物洁净室：凡在送风系统上装有高效过滤系统的房间,统称为~。

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　　标题： 滤器和层流室

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　　标题： (四)、干燥与低温抑菌法

　　正文：

　　在低温状态下真空抽去水分

　　用途：保存菌种的最好方法(数年至数十年)

　　冷冻真空干燥法：

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　　标题： 二、化学消毒灭菌法

　　正文： 化学消毒剂的杀菌机制： 1.促进菌体蛋白质变性或凝固 2.干扰细菌的酶系统和代谢 3.损伤细菌的细胞膜 常用的化学消毒剂及防腐剂对人体组织都有危害，所以只限于外用或环境消毒。

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　　标题： 化学消毒剂按其杀菌能力分三大类

　　正文： (一)高效消毒剂——可杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物 1.含氯消毒剂-次氯酸钠、漂白粉等 机制：水中产生氯、次氯酸、新生态氧，具强大杀菌作用。 适于物体表面、饮用水、皮肤、地面、排泄物和污水消毒。 2.过氧化物消毒剂-过氧化氢、过氧乙酸 机制：氧化作用 10%~25%过氧化氢可杀死所有微生物，包括芽胞。适于物体表面和皮肤消毒。 3.醛类消毒剂-戊二醛、甲醛 机制：对细菌蛋白和核酸的烷化作用 戊二醛——适于精密仪器、内窥镜的消毒 甲醛——滤器的消毒。有毒 4.环氧乙烷：沸点为10.8℃ ，易蒸发。 机制：同甲醛 气体消毒剂。易燃、有毒。

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　　标题： 固体二氧化氯消毒剂二氧化氯在水中溶解饱和后，即可以气态向空中自然逸散，当空气中有效浓度达到4mg/m3，即可杀死99.99%的细菌、病毒和真菌，是当前新型的安全无毒、广谱高效的空气消毒净化剂。

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　　(二)中效消毒剂——不能杀灭细菌芽胞，但能杀灭细菌繁殖体、真菌和大多数病毒。 1.含碘消毒剂——碘酊、碘伏 机制：沉淀蛋白、氧化作用 碘伏——皮肤粘膜、体温计、物品表面的消毒 碘酊——对皮肤刺激作用，消毒后用75%乙醇将其擦净。 2.醇类消毒剂——乙醇(70~75%)、异丙醇 机制：去除细菌包膜中的脂类，并使菌体蛋白变性。 适于医疗护理器材、皮肤的消毒和浸泡体温计。

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　　(三)低效消毒剂——可杀灭多数细菌繁殖体，但不能杀灭细菌芽胞、结核分枝杆菌及抵抗力强真菌和病毒。 1.季铵盐类——苯扎溴铵(新洁尔灭) 机制：阳离子表面活性剂。吸附于细菌表面，改变胞壁通透性，使菌体内酶、辅酶、代谢中间产物逸出，呈杀菌作用。 表面活性剂即去垢剂，具清洁作用 适于皮肤、粘膜、物体表面、地面消毒。 2.氯已定(洗必泰)—— 适于皮肤、粘膜、物体表面、地面消毒。 3.高锰酸钾——氧化杀菌 适于皮肤、粘膜冲洗、浸泡消毒以及食具、蔬菜、水果的消毒。

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　　标题： 第二节 消毒灭菌的运用

　　正文： (一)高危器械物品 用时需进入无菌组织 的物品。所有这些物品都应该灭菌。 (二)中危器械物品 用时不进入无菌组织 但接触黏膜的器械。采用消毒即可。 (三)低危器械物品 只接触未损伤皮肤但 不进入无菌组织和不接触黏膜的物品。 一般用后清洗、消毒即可。 (四)快速周转的医疗器械(牙钻) 微波灭菌、高效消毒剂快速处理

　　一、医疗器械物品的消毒灭菌

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　　正文： (二)室内空气消毒灭菌 1.物理消毒法 ①紫外线照射(1.5W/m3，1h)最常用;②滤过除菌：空气通过孔径小于0.2um的高效过滤装置以除去细菌和带菌尘埃。 2.化学消毒法 包括化学消毒剂喷雾和熏蒸：①过氧乙酸喷雾、熏蒸;②过氧化氢喷雾;③二氧化氯溶液喷洒;④中草药点燃烟熏。 (三)手和皮肤的消毒 用肥皂和流动水经常并正确洗手 病原微生物污染时应用消毒剂消毒。

　　标题： 第二节 消毒灭菌的运用

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　　正文： (四)黏膜的消毒 口腔-3%过氧化氢;阴道、尿道-0.1%～0.5%氯已定 (五)病人排泄物与分泌物的消毒灭菌 粪、尿、痰-50g/L次氯酸钠、漂白粉1h (六)病人污染物品的消毒 煮沸15～30分钟、0.5%过氧乙酸浸泡30分钟、5%有效氯的消毒液30分钟 (七)饮水的消毒 自来水-氯气、饮用水-漂白粉 (八)环境的消毒 室内-0.2%～0.5%过氧乙酸30～60分钟、厕所、阴沟-生石灰

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　　标题： 第三节 影响消毒灭菌效果的因素

　　正文： 一、微生物的种类 对消毒灭菌敏感性高低排序：真菌、细菌繁殖体、有包膜病毒、无包膜病毒、分枝杆菌、细菌芽胞。 二、微生物的物理状态 营养缺陷下生长微生物抵抗力>营养丰富 三、微生物的数量 数量多，所需消毒时间长 四、消毒剂性质、浓度与作用时间 五、温度 温度升高可提高消毒效果 六、酸碱度 苯扎溴胺的杀菌作用是PH愈低，杀菌所需药物浓度愈高。 七、有机物 影响消毒剂效果，并消耗药品。

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　　标题： 第四节 病原微生物实验室生物安全

　　正文： 生物安全(biosafety)是生物技术安全(safety of biotechnology)的简称。 狭义地指现代生物技术的研究、开发、应用及转基因生物可能对生物多样性、生态环境和人类健康产生潜在的危害。 广义地指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康及生态环境所产生的危害或潜在风险。

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　　正文： 病原微生物所致的安全问题，如病原微生物实验室的安全隐患、生物武器、生物恐怖、重大传染病的暴发流行等，也是人类社会所面临的最现实的生物安全问题。 ??? 病原微生物实验室生物安全的核心是防扩散和防感染。 ???? 关于病原微生物实验室生物安全，我国法令包括对病原微生物的分类管理，对实验室的分级管理，实验室感染的控制以及监督和法律责任等。?

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　　标题： 一、病原微生物的分类

　　正文： ??? 根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，病原微生物分为四类： 第一类是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。 第二类是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。

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　　标题： 一、病原微生物的分类

　　正文： ???第三类是指能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。 第四类是指在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。 ??? 第一类、第二类统称为高致病性病原微生物。

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　　标题： 二、病原微生物实验室的分级

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　　正文： 一、二级实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动。三级、四级实验室从事高致病性病原微生物实验活动。 从事高致病性病原微生物相关实验活动应当有2名以上的工作人员共同进行。在同一个实验室的同一个独立安全区域内，只能同时从事一种高致病性病原微生物的相关实验活动。应有健全安全保卫制度 。

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　　实验室工作人员应掌握实验室技术规范、操作规程、生物安全防护知识和实际操作技能。应有符合要求的防护用品，应建立健康档案;进行预防接种。 实验室应有科学、严格的管理制度，定期对实验室设施设备、材料等进行检查、维护和更新，应对废水、废气以及其他废物进行合理处置，防止环境污染。

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　　标题： 生物安全

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　　标题： 三、实验室感染的控制以及监督和法律责任

　　正文： ? 实验室感染控制工作包括定期检查实验室的生物安全防护、病原微生物菌(毒)种和样本保存与使用、安全操作、实验室排放的废水和废气以及其他废物处置等实施情况。 实验室发生高致病性病原微生物泄漏时，预防、控制措施包括：①封闭被病原微生物污染的实验室或可能造成病原微生物扩散的场所;②开展流行病学调查;③对病人进行隔离治疗，对相关人员进行医学检查;④对密切接触者进行医学观察;⑤进行现场消毒;⑥对染疫或者疑似染疫的动物采取隔离、扑杀等措施。

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　　正文： 监督的主要内容是监督病原微生物实验室执行国家有关法律、行政法规、国家标准和要求的记录、档案及报告的情况。 法律责任的核心是承担造成传染病传播、流行或者其他严重后果的法律责任。

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　　标题： 思考题

　　正文： 消毒、灭菌、防腐、无菌的概念 消毒灭菌的方法及适用范围 简述紫外线杀菌的原理、方法、特点。 在温度和时间相同的情况下，为什么湿热灭菌法的效果比干热法好?