RNA在病原微生物检测中的应用.ppt

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　　标题： RNA在病原微生物检测中的应用

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　　标题：摘要

　　其他占位符：主要分子检测技术原理及差异 RNA扩增技术用于病原体检测的优势国内外病原体检测现状 RNA扩增技术在临床中应用小结

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　　标题：摘要

　　其他占位符：主要分子检测技术原理及差异 RNA扩增技术用于病原体检测的优势国内外病原体检测现状 RNA扩增技术在临床中应用小结

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　　标题：病原体检测方法分类

　　其他占位符：以看到“整个病原体”为基础的方法镜检，培养以直接或间接看到“病原体组分-蛋白质”为基础的方法免疫学胶体金，Elisa, 化学发光，etc 以看到“病原体组分-核酸”为基础的方法分子生物学

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　　标题：分子诊断概念和特点

　　正文：概念：利用标本中的核酸作为检测对象，对感染性疾病、肿瘤、遗传性疾病等进行诊断和预后判断的方法。

　　特点：特异性高、灵敏度高诊断范围广、适应性强

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　　标题：什么是核酸?

　　链状分子 DNA (脱氧核糖核酸) 贮存遗传信息 RNA (核糖核酸) 传递遗传信息

　　(Gp:) 遗传信息的传递途径

　　(Gp:) DNA

　　(Gp:) RNA

　　(Gp:) 蛋白质

　　(Gp:) 转录

　　(Gp:) 逆转录

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　　DNA vs. RNA(一)

　　DNA是双螺旋结构，RNA是单链结构 DNA很稳定，RNA很不稳定

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　　DNA vs. RNA(二)

　　有些RNA在细胞中拷贝数很多

　　(Gp:) 一个或几个拷贝DNA

　　(Gp:) 104核糖体RNA (rRNA)

　　(Gp:) 16S rRNA

　　(Gp:) 23S rRNA

　　使用rRNA为靶标，可以大大提高了取样效率和检测灵敏度。

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　　标题：常见的RNA检测技术

　　NASBA(国外) TMA(国外) SAT(国内)

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　　标题： SAT技术原理

　　(Gp:) ①

　　(Gp:) ②

　　(Gp:) ③

　　(Gp:) ④

　　(Gp:) 同一温度下，首先通过M-MLV反转录酶产生靶标核酸(RNA)的一个双链DNA拷贝。然后利用T7 RNA多聚酶从该DNA拷贝上产生多个(100～1000个)RNA拷贝; 带有荧光标记的探针和这些RNA拷贝特异结合，产生荧光。该荧光信号可由荧光检测仪器实时捕获，直观反映扩增循环情况; 同时，每一个RNA拷贝再从反转录开始进入下一个扩增循环。?

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　　标题： SAT与PCR技术原理比较

　　(Gp:) RT

　　(Gp:) RNA

　　(Gp:) cDNA

　　(Gp:) RT

　　(Gp:) ~1000 copies

　　(Gp:) T7

　　(Gp:) SAT

　　(Gp:) DNA

　　(Gp:) Taq

　　(Gp:) PCR

　　(Gp:) 30分钟内扩增1010倍

　　RNA

　　DNA

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　　SAT配套仪器(全自动工作站)

　　(Gp:) 样本---提取纯化RNA--- 酶反应混合液(一体化) 全封闭生物安全性好快(48个样本/2.5小时)

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　　标题：摘要

　　其他占位符：主要分子检测技术原理及差异 RNA扩增技术用于病原体检测的优势国内外病原体检测现状 RNA扩增技术在临床中应用小结

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　　DNA用于临床检验的不足

　　“死菌检测也阳性”，与临床相关性差基因型与表型不吻合 (耐药检测) 不能区分“潜伏感染”“活动性感性” 易交叉污染反应易受抑制

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　　SAT检测靶标为16SrRNA灵敏度更高

　　RNA在细胞中拷贝数很多，细菌中16s rRNA多达10000-20000个

　　(Gp:) 一个或几个拷贝DNA

　　(Gp:) 104 16s rRNA

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　　Jensen, 1994

　　- 16SrRNA具有高度保守性不同来源MG的16SrRNA区域，PCR产物序列同源性100%，准确区别不同病原体

　　SAT检测靶标为16SrRNA检测特异性高

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　　16SrRNA长度适中，适合做探针，检测更准确

　　其编码基因长度约为1500bp, 包含50个左右功能域

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　　RNA诊断(TMA、SAT)具有非常高的灵敏度和准确度

　　(Gp:) Gen-probe: RNA检测

　　(Gp:) 罗氏:DNA检测

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　　与DNA相比，RNA检测更利于疗效评估及判愈

　　DNA双链结构，较稳定，不易降解。治愈后仍有“死菌”残留，人体内完全代谢需2-3周时间 <<中国性病诊疗指南>>中指出，如用PCR方法进行判愈，需在疗程结束后3-4周。 RNA单链结构，易降解，病原体死亡后2-3天后完全降解与临床相关性好，=“培养” ，有利于疗效评估和及时判愈有些情况下，可以直接诊断“活动性感染” 活动性感染：指示RNA转录活跃潜伏感染：指示RNA不转录

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　　其他占位符：能检测多种样本类型，比如尿液等，取样方便。

　　数据来源：M. Chernesky, D. Jang, K. Luinstra, et al. 2006. High Analytical Sensitivity and Low Rates of Inhibition May Contribute to Detection of Chlamydia trachomatis in Significantly More Women by the APTIMA COMBO 2 Assay. J. Clin. Microbiology 44 (2): 400-405.

　　反应不易受抑制

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　　SAT诊断技术对于病原体检测中的优势

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　　标题：摘要

　　其他占位符：主要分子检测技术原理及差异 RNA扩增技术用于病原体检测的优势国内外病原体检测现状 RNA扩增技术在临床中应用小结

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　　国内外RNA诊断产品监管机构认可情况

　　国外：FDA或CE 认证产品 (TMA)

　　国内：SFDA 认证产品 (SAT) 沙眼衣原体(CT)核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增) 淋病奈瑟菌(NG)核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增) 解脲脲原体(UU)核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增) 生殖支原体(MG) 核酸检测试剂盒 (RNA恒温扩增) 结核分枝杆菌(TB)核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增) 肠道病毒71型(EV71)核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增) 柯萨奇病毒A16型(CA16)核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增) 肠道病毒(EV)通用型核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增) 肺炎支原体(MP)核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增)

　　(Gp:) ......

　　为什么我们必须熟悉和了解RNA检测技术?(一)

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　　标题：为什么我们必须熟悉和了解RNA检测技术?(二)

　　(Gp:) 血液筛查市场

　　(Gp:) 美国

　　(Gp:) 中国

　　(Gp:) RNA诊断

　　(Gp:) 传统技术

　　(Gp:) 其他传染病市场(优生优育：CT/NG为例)

　　(Gp:) RNA诊断

　　(Gp:) 传统技术