革兰氏染色及细菌形态观察.ppt
1615251280解决。
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医学微生物学实验(一)
革兰氏染色及细菌形态观察
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平时成绩 8分 操作考试成绩 12分 说明： 旷课：一次扣2分，四次总成绩不及格; 作业：教师评分C以下一次扣0.5分;
标题： 微生物实验课成绩计算
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标题： 实验室内的“宜”与“忌”
宜： 白大褂 爱惜仪器设备 台面整洁 忌： 吃东西、吸烟、高声喧哗 实验室物品带出室外 用一只酒精灯点燃另外一只
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1.熟悉革兰氏染色法原理、 步骤、结果、意义 2.掌握油镜的使用 3.掌握细菌的基本形态和特殊结构
实验目的、要求：
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革兰氏染色法是丹麦年轻的医师、细菌学家Hans Christian Joachim Gram于1884年(时年31岁)创建的,至今仍广泛应用用于细菌分类和鉴别。
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标题： 1.1 革兰氏染色法原理
等电点学说: 结晶紫在水溶液中呈电离状态，带一个正电荷，与细菌细胞中带负电荷的基团发生静电结合，而使之呈紫色。G+的等电点在PI(2-3)，比G-菌PI(4-5)低，因此G+细菌与结晶紫的结合力更强。碘为弱氧化剂，可降低细菌的等电点，由于两者解离基团数量的差别，使G+细菌的等电点下降幅度大于G-细菌，致使两类菌的等电点差异扩大，因此阳性菌和结晶紫的结合力比阴性菌更强，对乙醇脱色的抵抗力更强，导致其菌体与染色剂形成的复合物难以被乙醇提取，呈紫色。而G-细菌与染色剂的结合力弱，其菌体与结晶紫，碘化物的复合物很容易被提取而呈现无色。
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其他占位符： 化学学说： 碘液在菌体内与结晶紫结合后又和菌体内核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结合，此结合物不易被丙酮酒精脱掉，呈革兰氏染色阳性。因革兰氏阴性菌缺乏核糖核酸镁盐，故对碘与结晶紫结合物摄取少，且不牢固，易被丙酮酒精脱色而呈革兰氏阴性。
标题： 1.1 革兰氏染色法原理
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其他占位符： 渗透学说： G+菌细胞壁厚20~80nm,脂类含量低，肽聚糖含量高(占细胞壁干重的50%~80%)，15~50层 G-细胞壁10~15nm,脂类含量高，肽聚糖含量低(占细胞壁干重的5%~20%)，1~2层。肽聚糖是结晶紫发生静电结合的物质。 G+菌结构致使结晶紫易进难出，而G-菌结构是难进易出 G+脂类少，无外膜，乙醇既能抽取结晶紫复合物，也能脱水，由于没有外膜保护，水很容易被脱出，肽聚糖网眼缩小，染色剂不易渗出，仍留在肽聚糖分子上，使脱色不明显，仍显紫色，难以在复染时候染成红色。G-细胞壁脂类含量高，具有脂类外膜，阻止乙醇脱水时水外渗，从而保持原肽聚糖分子网眼大小，另一方面由于细胞壁中的脂类被乙醇溶解，增加细胞壁通透性，乙醇很容易进入细胞内，将染色复合物提取出来，使菌体呈现无色，从而容易被复红染成红色。
标题： 1.1 革兰氏染色法原理
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涂片 干燥 固定
标题： 1.2 革兰氏染色步骤
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标题： 1.2 革兰氏染色步骤
1min
1min
20-30S
1min
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注意事项： 涂片：均匀，不过多、过厚; 固定温度：适宜 水洗：不直接冲洗涂面，水流不过大 乙醇脱色：严格控制在30s以内 菌株选用：幼龄
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标题： 1.3 革兰氏染色意义
1，观察细菌形态，初步鉴别，将其区分为两大类 2，指导临床用药，eg,大多数G+菌对青霉素、红霉素敏感，而大多数G-菌对氯霉素、妥布霉素敏感 3，有利于致病性分析，eg,大多数G+菌以外毒素致病，而G-菌以内毒素致病
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实验思考
1. 为什么革兰氏染色后细菌会分出两种颜色?
3. 革兰氏染色最关键的是哪一步，此时阳性菌和阴性菌各应该 是哪种颜色?
6. 固定的目的之一是杀死细菌，这与用自然死亡的菌体进行染色有什么不同?
2. 如果没有媒染会导致什么样的结果?
4.不经过复染能不能区别革兰氏阳性菌和阴性菌?
5.不经过复染的染色结果是什么??
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标题： 显微镜使用方法
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油镜使用
1.观察时，一定要注意玻片的正反面，标本面应向上。 2.标本干燥后才能滴加香柏油。 3.加香柏油要适量，不宜太多或太少。 4.缓慢转动粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。
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(Gp:) 金黄色葡萄球菌(10×40)
(Gp:) 大肠杆菌(10×40)
染色结果观察
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实验完毕后的处理：
1.将浸过油的镜头按照下述方法擦拭干净：
a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。
b.用擦镜纸沾少许二甲苯(?)将镜头擦2-3次。
c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。`
?注意擦镜头时向一个方向擦拭。
2.镜检后的染色玻片用纸将香柏油擦干净。
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细菌的基本形态
球菌Coccus
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细菌的基本形态
杆菌Bacillus
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细菌的基本形态
螺形菌Spiral bacterium
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细菌的特殊结构
荚膜(capsule)
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细菌的特殊结构
芽胞(nuclear material ornucleoid)
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细菌的特殊结构
鞭毛(flagellum)
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标题： 1，确保油镜头擦拭干净!载玻片放入指定地点 2，下周实验课上课前交实验报告，值日生留下 下周实验课(细菌的人工培养)
愉快的玩耍之前请同学们注意：